法舒地尔在实验性变态反应性神经炎中的保护影响.pdfVIP

法舒地尔在实验性变态反应性神经炎中的保护作用 研究生：赵亮 专业：老年医学 导师：曹秉振教授 中文摘要 目的： 作格林一巴利综合征(Guillain—Bane inflammation 髓鞘性多发神经炎(aeute demyelinative 动物模型【11，探讨治疗GBS的新方法【2】。 笔者根据应用ROCK抑制剂法舒地尔阻断ROCK活性后，多种炎性疾病症状明 显改善的研究报告【3_51，运用ROCK抑制剂法舒地尔治疗发病初期EAN，通过观察 疗作用并探讨其免疫保护机制，为GBS提供新的治疗途径。 方法： 1．抗原：髓鞘抗原P2免疫优势肽段53．78aa。 2．实验动物：以8周龄雌性路易斯大鼠30只，体重110-1209，SPF级饲养。 后肢足垫皮下。每日定时进行临床评估，直至免疫后28天(于高峰期每组处死6只)。 当天用微型注射器通过腹腔注射法舒地尔注射液(25mg／kg．d)治疗，一直注射到免疫后 14天为止。 5．电生理检查：大鼠于处死前进行坐骨神经传导速度、运动诱发电位波幅、M波 潜伏期检查(n=6)。 6．组织病理学检查：于免疫后高峰期处死大鼠(n锸)，取坐骨神经近脊髓段，10％ 多聚甲醛固定，石蜡包埋，纵行切片(56I_tm，每根神经2张连续切片)，HE染色、 Gomorii染色，HE染色应用计算机图像分析系统40倍物镜下采集图像。 ．1． ．7．电镜观察：于疾病高峰期处死大鼠，取材：3％戊二醛前固定一l％锇酸后固定一 梯度脱水—渗透—包埋—聚合一半薄定位一超薄切片—铅铀染色一电镜观察，并行 半薄切片，甲苯胺蓝染色，高倍光镜观察。 8．免疫组化检测：大鼠坐骨神经冰冻石蜡切片，经过常规脱蜡、牛血清白蛋白封 闭、阻断过氧化物酶活性、滴加一抗和二抗、DAB显色、苏木苏染色、脱水、透明、 封固等处理。在40倍物镜下观察图像、细胞阳性反应，结果以细胞数／m皿?组织表示。 9．血清细胞因子检测：观察大鼠临床表现并分别在免疫后14天高峰期采用Elisa 作用并探讨其免疫保护机制。 结果： 1．盐酸法舒地尔可延迟EAN发病时间，缓解发病程度。 2．电生理检查显示EAN组大鼠坐骨神经运动传导速度、F波潜伏期与对照组相比 无明显差异，运动诱发波幅明显降低与治疗组、对照组相比有统计学意义，胫前肌肌 电图可见尖波及纤颤电位(P0．05)。 3．坐骨神经电镜检查结果及病理改变：盐酸法舒地尔可减少炎症细胞在外周神 经浸润、缓解神经组织损伤。 4．免疫组化结果：结果显示相对EAN组，法舒地尔明显降低坐骨神经INF．伍、IL．17 等促炎因子的表达。 5．血清细胞因子水平：应用酶联免疫吸附法检测血清INF．眠IL一17水平，结果显 示法舒地尔可明显降低EAN大鼠血清INF．a、IL．17水平。 结论： 1．法舒地尔可以有效治疗大鼠EAN，能够延缓发病时间、降低发病率、缓解临床 症状，减轻周围神经炎性浸润和髓鞘脱失等周围神经组织损害。 子可能是其作用机制之一。 关键词：动物模型；实验性变态反应性神经炎；盐酸法舒地尔；INF．a；IL．17 PROTECTROLESoFHYDROCHLOIUCFASUDILIN ALLERGIC EXPERIM匝NTALNEURITIS Student：Zhao ‘PostgraduateLiang Speciality：presbyatrics Cao Supervisor：Bingzhen ABSTRACT Ubjective： Guillain-Barre themaincauseof dis