白花丹参药理性预适应对缺血缺氧神经损伤的保护作用和机制研究.pdfVIP

白花丹参药理性预适应对缺血／缺氧神垄 l 保护作用及机制研究 研究生： 左 欢 专业： 神经病学 导 师： 牛敬忠 教授 中文摘要 目的： 观察预先给予不同浓度白花丹参带药血浆进行药理性预适应 (pharmacological 经细胞缺血／缺氧损伤后细胞活力及其凋亡调节蛋白(Bax、Bcl．2)表达的影 响。初步探讨白花丹参根水提物作为药理性预处理物的可行性及其显效剂 量，揭示白花丹参神经细胞保护作用的机制。 方法： 采用氧糖剥夺(oxygen．glucose 乳鼠海马神经细胞缺血／缺氧损伤后细胞凋亡模型。将体外培养的Wistar乳 体外培养第8天，分别全量更换为高、中、低浓度白花丹参带药血浆及不含 制作体外培养Wistar乳鼠海马神经细胞缺血／缺氧损伤后细胞凋亡模型，并 进行相应实验指标的检测。采用MTT比色法检测细胞活力，荧光显微镜 Annexin V-FITC／PI双染法检测细胞凋亡时相，荧光显微镜免疫荧光染色法 检测凋亡调节蛋白Bax及Bcl．2的表达。 结果： ①MTT比色法检测细胞活力结果显示：与空白对照组(C组)相比较， 白花丹参高剂量组(H组)、白花丹参中剂量组(M组)及白花丹参低剂量 18(P0．05)， 1 1 及白花丹参中剂量组(M组)差异具有统计学意义(P0．05)。 ②荧光显微镜免疫荧光染色法检测凋亡调节蛋白Bax及Bel．2结果显示： BcI．2蛋白阳性染色主要位于神经细胞胞浆、核膜及突起中，为绿色荧光。 空白对照组(C组)BcI．2蛋白表达较少，荧光强度低；与空白对照组(C组) 相比，白花丹参高剂量组(H组)、白花丹参中剂量组(M组)及白花丹参 低剂量组(L组)Bcl．2蛋白表达明显增多，荧光强度增高，光密度值均有不 同程度增高，差异具有统计学意义(PO．05)。Bax蛋白阳性染色主要位于 神经细胞胞浆、核膜和突起中，为绿色荧光。空白对照组(C组)Bax蛋白 表达较多，荧光强度强；与空白对照组(C组)相比，白花丹参高剂量组(H 明显减少，荧光强度降低，光密度值均有不同程度降低，差异具有统计学意 义(P0．05)。 V-FITC／PI双染法检测结果显示：凋亡早期 ③免疫荧光显微镜Annexin 细胞膜呈绿色荧光(FITC荧光)：凋亡中晚期细胞核呈红色荧光(PI荧光)， 细胞膜呈绿色荧光(FITC荧光)；凋亡晚期和死亡细胞只可见细胞核红色荧 光(PI荧光)，细胞膜崩解。空白对照组(C组)可见大量中晚期凋亡和死 亡神经细胞。白花丹参高剂量组(H组)、白花丹参中剂量组(M组)及白 花丹参低剂量组(L组)则以早期凋亡细胞为主，偶见凋亡中晚期细胞及死 亡细胞。 ． 结论： 1．不同剂量白花丹参药理性预适应对体外培养Wistar乳鼠海马神经细胞 具有保护作用，以白花丹参中剂量、高剂量的保护作用较为显著。 2．不同剂量白花丹参药理性预适应对体外培养Wistar乳鼠海马神经细胞 的保护作用机制与增加Bel．2表达，降低Bax表达有关。 关键词：白花丹参；药理性预适应；细胞凋亡；Bax；Bel．2 2 oFSALVIA PROTECTIONANDMECHANISM BEGF．ALBA MILTIORRHIZA NEURoNSINJURIES PRECoNDITIONINGoN