肠道Na+胆汗酸转运体及高脂血症关系的研究.pdfVIP

Illllllllt]llttlII I IIl illIItILLil ；Y1 肠道Na+／月_8汁酸转运体与高脂血症关系的研究 摘要 目的：本研究通过建立高脂血症大鼠模型，以肠道Na+／胆汁酸转运体 bileacid (ileal 汁酸转运体与胆汁酸代谢及高脂血症形成的相关性，为防治高脂血症 提供新的依据和分子理论基础，有望为治疗胆汁酸代谢紊乱及相关性 疾病提供一种新的思路。方法：取Wistar雄性大鼠(体重145±8．59) 60只，随机分为2组，每组30只：普通饮食对照组(简称对照组)、高脂 饮食实验组(简称实验组)。对照组予以普通饮食，实验组予以高脂饮 食(配方为：在基础饲料中加入质量分数为0．04胆固醇、0．1猪油、 脂血症模型，定期取血用自动生化仪检测胆固醇含量，4-6周监测血 胆固醇水平，观察建模是否达到要求。两组入选大鼠均需排除已饮用 含其它类药物饮食，高脂血症、糖尿病、畸形等疾病存在。建模成功 后，所用实验方法分为以下两个环节：1．分别提取对照组和实验组的 空肠末端、回肠末端、盲肠及结肠近端组织的RNA，应用逆转录一聚合 chainreact 酶链反应(RT-polymeraseion；RT-PCR)技术检测两组模 型肠组织的IBAT基因表达的强度；2．取对照组和实验组的空肠末端、 回肠末端、盲肠及结肠近端组织，石蜡切片后用免疫组化SP for 强度。统计数据运用SPSSl4．0windows统计软件包作统计学处理， PO．05显示有统计学意义。结果：1．电泳结果显示：实验中空肠末 端、回肠末端、盲肠扩增产物都出现了内参B-actin基因的220bp扩 强于对照组。结肠近端中未见IBAT基因扩增带。半定量结果分析：利 用QuantityOne软件计算比较每一泳道中PCR产物条带的光密度值， 计算IBAT基因与B-actin条带的光密度的相对比值，通过比较各样本 IBAT基因的相对值，最终得出IBAT基因在空肠、回肠末端、盲肠组织 中mRNA表达的相对含量。半定量结果的相对光密度值需每组每一实验 对象同等处理条件下均重复测定3次，取其最终平均值作为统计用数 据。最后结果显示：结肠近端在实验组和对照组均无表达，其余在对 空肠近端(户一25．6988 PO．05)、 PO．05)、回肠末端(户一15．446 盲肠(户一24．007PO．05)，均有统计学意义‘。 高倍显微镜镜下肠道组织中出现黄色染色颗粒为阳性细胞。每张切片 随机选取5个视野，每个视野内观察100个细胞，阳性细胞≥10％为 阳性，否则为阴性，利用四格表的Fisher确切概率法检验。结果显 示：实验组空肠末端、回肠末端、盲肠表达阳性率分别为66．3％、 78．5％、55．3％；对照组空肠末端、回肠末端、盲肠表达阳性率为 10．3％、12．5％、8．95％。它们之间的差异有显著性，空肠末端IBAT PO．05)， 基因(胙9．631／KO．05)，回肠末端IBAT基因(胙9．873 盲肠IBAT基因(胙9．209P(O．05)。结论：1．实验组大鼠的IBAT 基因mRNA的表达较对照组明显增加。2．实验组和对照组大鼠的结肠 近端中未见IBAT基因的表达。3．实验组空肠末端，回肠末端及盲肠 IBAT的表达明显高于对照组，故在高脂血症动物回肠中胆汁酸的主 动转运及空肠中胆汁酸的被动转运过程增强，及盲肠参与胆汁酸转运 增强，进而胆汁酸摄取率增加，增加体内胆酸池大小和肝内胆固醇含 量，从而引起血清胆固醇增加，加速高脂血症的形成。。 关键词：回肠Na+／胆汁酸转运体高脂血症胆汁酸循环 IlealNa+／bileacid and the of