肠三叶因子对小鼠炎症性肠病保护作用机制的探究.pdfVIP

·中文论著摘要· 肠三叶因子对小鼠炎症性肠病保护作用机制的研究 刖 吾 bowel disease，IBD)为一类病因尚未完全明确的累 炎症性肠病(inflammatory 及胃肠道的慢性非特异性炎症，一般指克罗恩病(Crohndisease，CD)和溃疡性结 肠炎(ulcerative 性结肠炎和克罗恩病患儿占炎症性肠病总数的25％．30％。近十几年的研究发现， 较常见的消化系统疾病。 IBD的肠道炎症和黏膜组织损伤是其主要特征。炎症性肠病的病因和发病机 制不明确，目前研究认为IBD是由基因的易感性，环境因素激发和肠道免疫系统 失调等多种因素交互作用引起的消化系统自身免疫性慢性炎症疾病。 IBD的免疫学发病机制被认为是感染、毒素及药物等作为始动因素破坏肠上 皮屏障，使肠组织暴露于大量抗原中，诱发遗传易感宿主的粘膜免疫反应。在IBD 肠道炎症和粘膜免疫损伤的发生发展中各种炎症细胞及细胞因子(如TNF．a)、 粘附分子、炎症介质等活性分子起着重要作用，它们参与粘膜炎症的多种免疫反 应，并作为免疫调节的中心环节，在IBD中的作用为越来越多的研究所证明。通 过特异性阻断这些炎症细胞和活性分子的产生、调控以及作用，下调免疫应答的 强度，从而控制炎症、持续缓解病情已被视为研究热点。 TLR(Toll．1ikereceptor，TLR)是近年发现的一种免疫受体，能识别病原微生物 molecular 肠粘膜上皮细胞及固有层细胞TLR4大量表达，激活下游的细胞因子信号转导， 募集炎性细胞，释放自由基，损伤黏膜，激发先天性免疫反应。 炎症性肠病(IBD)的病理表现在于肠道粘膜糜烂或溃疡形成，上皮细胞广 泛的缺失和固有层内的炎症细胞浸润改变。关于IBD病理机制目前虽不完全清楚， 但一般认为IBD的发生与上皮细胞破坏和凋亡加速、炎性细胞凋亡减慢有着密切 关系。细胞凋亡失调可以导致自身免疫性疾病的发生。越来越多的证据显示细胞 凋亡失调对炎症性肠病(IBD)的组织损伤和免疫功能紊乱有着重要的影响。 肠三叶因子(ITF)属于三叶肽家族，是一种新型的生长因子类多肽物质，具 有重要的胃肠道黏膜保护和修复作用。实验证明ITF在维持肠上皮细胞的完整性， 恢复肠粘膜的正常通透性方面起到重要作用。但现在很多证据把TFFs，特别是ITF 与免疫调节联系在一起。更有实验证实ITF可以调节坏死性小肠结肠炎幼鼠模型 的免疫反应。近年来的实验也证实ITF在调节细胞凋亡方面也具有一定作用，这 意味着ITF在IBD的治疗上可能具有更多的价值。但外源性给予基因重组ITF是 否可以对IBD模型小鼠起到保护作用?其机制是否与免疫调节和细胞凋亡干预有 关?这些问题的回答也为临床应用ITF治疗IBD提供理论依据。 实验材料及方法 一、动物模型及分组 健康6．8周龄雌性BALB／C小鼠，重量20．26克，由中国医科大学医学实验 动物中心提供。随机分为3组，每组16只(保证每组小鼠每个时间点取材时8只 以上)。根据灌肠药物及腹腔注射药物的不同将BALB／C小鼠分为3组： A组：三硝基苯磺酸(TNBS)组(直肠灌注5％TNBS0．10ml／只+50％乙醇溶液 O．10ml／只+灌肠后第2天起腹腔注射生理盐水0．1ml／只，连续5天)； B组：肠三叶因子(ITF)组(直肠灌注5％TNBS0．10ml／只+50％乙醇溶液0．10ml／ 只+灌肠后第2天起腹腔注射ITF0．1ml／只，连续5天)； C组：乙醇对照组(直肠灌注50％乙醇溶液0．20ml／只+灌肠后第2天起腹腔注射 肠生理盐水0．1ml／只，连续5天)； 灌肠后第7、14天断头处死动物，留取脾及结肠标本。实验过程中死亡动物 不列入本研究。 二、实验标本采集及处理 造模后每天观察动物一般状况、粪便情况及称量体重；在造模后的第7天和第 14天收集粪便测定大便隐血分数，进行疾病活动度指数(DAI)评分。同时给予 10％水合氯醛0．3ml／kg腹腔注射麻醉，处死，按以下方法处理和保存标本： 2 1、留取距肛门4cm左右的结肠组织约0．5era，分别经4％多聚甲醛溶液和2．5％ 戊二醛溶液固定，分别行H．E染色病理组织学计分、免疫组化、原位末端标记法 (TUN