阿托伐他汀通过大电导钙敏感钾通道和H2O2逆转IL-1β对大鼠主动脉平滑肌细胞膜电位影响研究.pdfVIP

·中文论著摘要· 阿托伐他汀通过大电导钙敏感钾通道及H202逆转 IL．1B对大鼠主动脉平滑肌细胞膜电位影响研究 研究背景 自九十年代Lippy，Ridker等人的研究证明冠脉粥样硬化是一种炎症过程以来， 围绕炎症与心血管疾病的基础研究如火如荼。II．,-lp是具有代表性的炎症因子，大 量文献报道IL．1p与冠心病、心力衰竭、血管痉挛等多种心血管疾病密切相关，而 动脉平滑肌细胞膜电位的变化是上述疾病病理过程的共同特征【l司。膜电位与细胞 代谢、增殖、迁移等多种生物学行为有关。已有报道IL-Ip在血管平滑肌细胞、神 经细胞、P12细胞、颈动脉体细胞等多种类型细胞中抑制钾通道开放降7】，进而影 响膜电位。血管平滑肌细胞膜电位与平滑肌血管舒缩反应性密切相关。血管平滑 肌细胞膜超级化，促使细胞膜上电压依赖性钙通道(Ⅵ)CC)关闭，外钙内流减 少，导致平滑肌舒张，即所谓的超极化舒张机制。超极化舒张机制是内皮源性舒 张受损的一种重要补偿机制嗍。血管平滑肌细胞上多种钾通道开放可使细胞膜超 极化。大电导钙敏感钾通道(BKca)是血管平滑肌的优势钾通道，是形成膜电 位的重要原因[9-111。BKca通．道敏感于血管平滑肌细胞内游离Ca2+、活性氧簇 (RoS)、三磷酸腺苷(ATP)、蛋白激酶和细胞膜电位等与细胞功能密切相关 的重要信掣12—7】。从“电．化学”角度推测，IL-ID通过调节血管平滑肌细胞膜电位对 细胞生物学产生影响。他汀类药物自1976年上市应用于临床治疗以来，其非调脂作 用，近些年来越来越引起人们的重视，一系列国内外大规模、随机、前瞻性研究均表 明，他汀类药物能够显著降低心血管事件发病率及死亡率，从而使他汀类药物在 心血管疾病预防及治疗中发挥越来越重要的作用。尤其是近些年来随着临床及基 础研究的不断深入，发现他汀类药物除调脂作用以外，还具有抑制炎症、改善内 皮功能、抗血小板聚集、稳定动脉粥样斑块以及抗心律失常等作用。相对于其调 脂作用，他汀类药物具有更强的心血管保护作用，其中他汀类药物抗炎作用正是 其调脂外作用的重要内容【13-191。大量研究认为，他汀类药物通过下调小G蛋白 上调细胞内一氧化氮(NO)水平【捌，另外他汀类药物作为一种活性氧簇(ROS)清 除剂可有效下调细胞内ROS水平。而NO及ROS是确切的BKea通道活性调节制剂 12122]。已有报道阿托伐他汀可直接开放血管内皮细胞BKca通道进而调节内皮细胞 膜电位【23】。有理由推测，他汀类药物可以调节血管平滑肌细胞BKca通道并因此调 节其膜电位从而发挥生物学作用。目前阿托伐他汀对血管平滑肌细胞BKca通道活 性及其膜电位的影响尚未见报道。本课题运用共聚焦显微镜技术和膜片钳技术， 以特异性BKcaJ亟道阻断剂为背景，观察阿托伐他汀对血管平滑肌细胞膜电位及 BKcaJ通道活性影响。并探讨在炎症病理生理情况下，阿托伐他汀能否逆转IL．1D 对血管平滑肌细胞膜电位及BKca通道活性的影响及其可能机制，对丰富他汀类药 物适应症，指导临床具有重大意义。 研究方法 本课题用阿托伐他汀处理大鼠主动脉平滑肌细胞(ASMCs)，观察在生理及 炎症病理情况下阿托伐他汀对大鼠ASMC膜电位及BKcaJ亟道的影响。运用激光共 聚焦显微镜观察不同浓度阿托伐他汀对大鼠ASMC膜电位的影响，分析在有无 IL-11j情况下，阿托伐他汀对大鼠ASMC膜电位的影响，并探讨其中的关联。为了 明确阿托伐他汀对BKca通道活性影响，我们运用单通道膜片钳技术内面向外模式 检测有或无IL-lfl存在时，阿托伐他汀对BKea单通道开放几率Po的作用。全细胞模 式下，观察阿托伐他汀对ASMC培养液全细胞钾电流Ⅸ的影响及IBTX降低Ⅸ幅度 变化。此外，阿托伐他汀处理与IL．1p共培养的ASMCs后我们检测细胞H202动 态变化。 研究结果 1、生理情况下阿托伐他汀对大鼠主动脉平滑肌细胞膜电位及大电 导钙敏感钾通道活性影响的研究 (1)生理情况下阿托伐他汀对ASMCs膜电位的影响 umol／L)共培养 ①ASMCs与各浓度组阿托伐他汀(10、25、50、100、150 2 6h后，与对照组(saline组)比较，膜