高尿酸诱导血管钙化的机制探究.pdf

摘 要 背景：尿酸 （UA）是嘌呤代谢产物。人类在进化的过程当中，由于尿酸酶的基 UA 因发生变异，致使其功能失活，使得人血 浓度显著高于其它哺乳类动物。 近年来，大量的临床调查及循证实践证实高尿酸血症 （HUA）是心脑血管系统 VC 疾病独立的危险因子。血管钙化 （ ）可导致血管脆性及僵硬度增加，增添了 动脉斑块、血管破裂及动脉瘤形成的危险性，是导致心肌梗塞、中风等心脑血 管事件的重要危险因子。高尿酸是否通过诱导血管钙化参与动脉硬化的发生和 发展，从而诱发各种心血管疾病值得探讨。血管钙化与血管壁细胞，尤其是血 管的平滑肌细胞在各类刺激因素作用下活化，转化成为成骨样细胞密切相关。 大量研究证实UA可以诱导血管平滑肌细胞（VSMC）增殖及氧化应激。高尿 酸是否通过诱导VSMC分化成为成骨样细胞，从而导致VC 目前尚不清楚，对 其进行深入研究，势在必行。前期工作中，课题组在国际上首次在动物模型中 发现高尿酸血症导致以早期出现弥漫性血管钙化为特征的动脉硬化的直接证 据。基于该发现，本课题拟对高尿酸血症导致动脉硬化的机制进行研究。 第一部分 尿酸诱导大鼠原代平滑肌细胞向成骨样细胞分化 目的：探讨尿酸是否可以在一般培养环境中刺激血管平滑肌细胞向成骨样细胞 转化。 α- 方法：分离、培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞，免疫组织化学方法检测 平滑肌 肌动蛋白鉴定VSMC。 1 0μmol/L 200μmol/L 400μmol/L 800μmol/L （）含不同浓度尿酸 （ ， ， ， ）的培养 基培养血管平滑肌细胞24h，48h和72h后，CCK-8法检测UA对VSMC增殖 的影响。 （2）含不同浓度尿酸 （0μmol/L，200μmol/L，400μmol/L，800μmol/L）的培养 3 7 14 3 基培养血管平滑肌细胞，分别作用 天， 天， 天，每 天换液一次。采用 碱性磷酸酶 （ALP）试剂盒微量酶标法测定培养液中的ALP活性，并通过细胞 蛋白定量计算相应的ALP活性值。 （3）将大鼠胸主动脉平滑肌细胞接种于24孔板，在含不同浓度尿酸（0μmol/L， 200μmol/L 400μmol/L 800μmol/L 14 ， ， ）培养基中连续培养 天，用茜素红矿化 结节染色。 4 VSMC 6 0μmol/L 200μmol/L （）将大鼠 接种于 孔板，在含不同浓度尿酸 （ ， ， 400μmol/L，800μmol/L）培养基中连续培养 14天。提取细胞总RNA，Real-Time PCR RT-PCR Runx2 BMP-2 OPNmRNA （ ）检测成骨细胞骨样标志物 、 、 水平变 化及平滑肌表型标志物SM22αmRNA水平变化。 万方数据 （5）将大鼠VSMC接种于6孔板，在含不同浓度尿酸 （0μmol/L，200μm