高糖对人成纤维细胞Wntbeta-catenin信号通路表达的作用.pdfVIP

摘 要 目的：创面愈合是一个复杂的生物学过程，是炎性细胞、修复细 胞、细胞外基质及细胞因子等多因素共同参与并高度协调、相互调控 的复杂过程。其中成纤维细胞在创面愈合中作用尤为重要。糖尿病患 者皮肤易受损伤，损伤后创面愈合延迟或不愈合。文献报道高糖对大 鼠皮肤成纤维细胞的增殖能力能明显起抑制作用。但具体机制不太明 了。有研究表明，在体外Wnt信号通路的持续激活后，人成纤维细 胞增殖能力增强。Wnt信号通路的激活能促进糖尿病溃疡的创面愈 合，Wnt信号通路能促进皮肤创面愈合。既往的动物实验表明Wnt 信号通路表达的增强能让糖尿病大鼠创面愈合加快。我们推测高糖可 能通过Wnt信号通路来引起人成纤维细胞增殖减少，从而影响创面 愈合的。而人成纤维细胞增殖能力与Wnt信号通路的关系未见报道， 为了证实我们的推测，我们设计了本实验来研究高糖对人成纤维细胞 增殖能力及Wnt信号通路的影响，并探讨人成纤维细胞增殖能力与 Wnt信号通路的关系。 ．方法：1人成纤维细胞的培养，每次弃去细胞培养瓶中的上清液， 加入含有10％胎牛血清的高糖DMEM培养基4-5ml，放置于37℃、 5％C02孵箱中培养。根据细胞生长情况1．2天换液一次，3．5天细胞 铺满培养瓶底、亚融合后进行传代。在培养过程中对人成纤维细胞进 高糖 行形态观测。分别以对照组(培养液中含25mmolPL葡萄糖)， 组：高糖组1(培养液中含40mmolPL葡萄糖)高糖组2(培养液中含 55 mmolPL葡萄糖)高糖组3(培养液中含70mmolPL葡萄糖)高糖 组4(培养液中含85mmolPL葡萄糖)甘露醇组：采用同高糖等渗甘 露醇甘露醇组1即40 甘露醇)甘露醇组2即55mmolPL等渗甘露醇(培养液中含 30mmolPL甘露醇)甘露醇组3即70mmolPL等渗甘露醇(培养液中 含45mmolPL甘露醇)甘露醇组4即85mmolPL等渗甘露醇(培养液 中含60mmolPL甘露醇)作用于体外培养的人成纤维细胞，2通过 细胞的增殖情况，3将在不同处理因素下人成纤维细胞中细胞总蛋白 的提取出来后经过电泳，转膜，蛋白质的Western印迹杂交后，通过 化学发光显影检测beta．catenin总蛋白的表达情况，结果用凝胶成像 One 4．4．0软件分析，结果数值以目的 仪扫描进入电脑，用Quantity 蛋白与内参蛋白13-actin蛋白条带平均INT值的比值表示。 结果：高糖可以抑制人成纤维细胞的增殖， MTT法检测到了高 糖对人成纤维细胞的增殖的抑制，免疫印迹法检测到高糖对人成纤维 细胞wnt／beta-catenin信号通路的抑制。 结论：高糖对人成纤维细胞增殖的影响与Wnt信号通路相关。 关键词：人成纤维细胞；高糖；Wnt／beta．catenin信号通路 on humanfibroblastswnt／beta-catenin Highglucose signaling pathway isa Abstract：Objective：Wound healingcomplicatedbiological consistsof cells、 process，which inflammatorycells、repairing extraceUular matrix、cell a1．Those factors，et factors inthe