高糖对HRPE细胞氧化应激及MMP-2,MMP-9表达的影响以及α-硫辛酸的干预作用.pdfVIP

中文摘要 以及Q．硫辛酸的干预作用 摘 要 目的：糖尿病视网膜病变(diabetic 病慢性微血管并发症之一，而且是全世界范围内成人导致视力下降，甚至 失明的主要因素之一。DR最常见的是黄斑变性和增殖性视网膜病变。随 着病程进展，几乎所有的1型糖尿病和一半以上的2型糖尿病患者均有不 同程度的视网膜病变，严重的影响了患者的生活质量。DR的发病机制主 kinase，PKC)的激活，糖基化终末产物的堆积， 要有蛋白激酶(protein 多元醇代谢通路异常，氧化应激学说，炎症反应，多种细胞因子参与等等。 氧化应激学说是目前比较公认的发病机制之一，而且趋向认为氧化应激很 可能是上述机制的始动因素。高糖刺激下氧自由基清除能力下降，导致氧 化产物堆积，在视网膜组织表现尤为突出。氧化应激可能引起PKC激活， 糖基化产物增加，多元醇通路等多条代谢途径异常。近年来，基质金属蛋 白酶(matrix 究热点。舯s是依赖Zn2+的蛋白水解酶家族，其生物学作用主要是促进 细胞外基质(extracellular 就是新生血管的生成，而这一过程的的前提是视网膜基底膜和ECM的降 解，周细胞的迁移。血管基底膜最主要的胶原成分是Ⅳ型胶原，MMP．2， MMP．9是降解Ⅳ型胶原最关键的明胶酶。国内外研究，不管是DR患者 的临床试验，糖尿病动物模型，还是高糖下培养视网膜细胞均证实 了重要的作用。但是高糖刺激MⅣ[Ps活性增加的具体机制尚未明确。而 硫辛酸作为应用广泛作用较强的抗氧化剂，在视网膜细胞也无一例外。国 retinal 内已有研究，将50I．tl的丙烯醛作用于人视网膜色素上皮(human pigment 干预作用，结果证明一定浓度的硫辛酸对其有保护作用。本实验通过不同 浓度的硫辛酸作用于高糖体外培养HRPE细胞48小时，观察MMP一2， MMP一9的表达活性及氧化应激指标的变化，探讨高糖引起MMP$表达变化 中文摘要 的机制以及硫辛酸的保护作用，有可能为寻找DR的预防和治疗找到新的 途径。 方法：体外培养HRPE细胞，选取生长状态良好的对数期细胞入组。 5．56 mmol／L，DMEM培养液)，高 实验分为八组：正常对照组(glucose 30 糖组(glucose 30 30 mmol／L)， mmol／L，DMEM培养液)，甘露醇组(mannitol 加入glucose 培养48小时，观察HRPE细胞的形态，MTT法检测生存活力，比色法检 Western Blot检测MMP．2，MMP．9蛋白表达量。 结果： l与正常对照组相比，高糖组的SOD，GSH表达活性均明显减低，MDA 含量明显增加，有统计学差异(PO．05)。甘露醇组则变化不明显(尸 0．05)。 加入硫辛酸干预，SOD，GSH的表达活性增加，MDA含量减少，除 1 依赖性。并且药物剂量组间比较可知，除硫辛酸100，2009mol／L组外， GSH则无明显的组间差异(PO．05)。 2与正常对照组相比，高糖组的MMP．2，MMP．9的蛋白表达量均显著升 高，有统计学差异(PO．05)。甘露醇组则无明显变化(PO．05)。 加入硫辛酸干预，MMP．2，MMP．9的蛋白表达量均有所下降，除 1 依赖性。药物剂量组间比较可知，任意两组不同的浓度MMP．2的表达均 O．05)。 结论： l高糖环境可以引起视网膜色素上皮细胞的氧化应激，以及MMP．2， MMP．9的表达活性增加，可能在糖尿病视网膜病变的过程中发挥重要作 用。 中文