高糖对腹膜间皮细胞细胞外基质影响的探究.pdfVIP

中文摘要 莉 置 腹膜透析(PD)是终末期肾脏病替代治疗的重要手段之一， 其长期有效的进行有赖于腹膜透析效能的良好维持。随着腹透患 者生存率的不断提高，腹膜超滤失败、腹膜纤维化等远期并发症逐 渐得到重视。长期腹膜透析患者腹膜持续暴露于酸性、高渗、高糖 的非生理性透析液，导致第一道生理屏障——腹膜问皮细胞 (PMCs)发生显著的形态学改变：如细胞表面微绒毛消失、细胞增 大甚至细胞剥脱、间皮细胞下基质增多，一些病人可出现基底膜增 厚及间质中微血管壁增厚等糖尿病样病变，代之以大量纤维组织， 形成无细胞区最终导致腹膜纤维化。上述结构改变会影响腹膜的 透析效能：腹膜的通透性增加、葡萄糖(Glc)吸收加快，导致超滤 下降。大量研究表明：高糖是造成PMCs损害进而导致透析效能 下降、超滤能力丧失及腹膜纤维化的主要原因。腹膜间皮细胞可 产生细胞外基质，它参与基底膜的构成对维持其结构的完整起重 要作用。腹膜纤维化的组织学检查发现细胞外基质明显增多。因 此有必要研究和探讨高糖对PMCs细胞外基质产生的影响，为减 轻腹膜纤维化提供新的途径。而PMCs的体外培养则为该研究提 供了细胞模型。 已有研究表明：肾小球系膜细胞在糖尿病相关因素：蛋白激酶 C(PKC)激活剂——佛波酯(PMA)的作用下上调，并伴有细胞对 Glc净利用的增加以及伴有细胞外基质的合成增加；参与了糖尿 病肾病的发生发展。我们已完成的实验表明：PMCs暴露于高糖 情况下，刺激了HKs在PMCs的表达，因此有必要进一步研究高糖 在刺激HKs活性增加的同时是否也刺激了PMCs细胞外基质的合 成及分泌。j 7 ．】． 本实验利用原代培养的PMCs，主要研究糖尿病相关因素：高 糖对PMCs细脆外基质舍成及分泌的彩晌；并观察PKC激溪齐j (PMA)、PKC搀制剂(G1i6976)对细胞外基质合成及分泌的影响， 为进一步探讨如何减少细脆外基质的合成及分泌从而为减轻腹膜 纤维佬提供豢的理论畿据。 ， {实验材料与方法 实验材辩 1．实验动物：雄性SD大鼠 2。实验用缨腱：琢代壤养酶媵簇阕发细胞 3．细胞培养、传代及鉴定的相关试剂 4．检测细脆外基质层粘连蛋白(LN)、Ⅳ墅胶藤(coilⅣ)的赦 免试剡盒 实验方法 1．胰猿自酶消纯法遗符大鼠PMCs的漂代壤莽 2，间接免疫荧光法用予PMCs的鉴定 3．观察不阿浓度的葡萄糖、PMA及PKC抑箭剂对细胞外基质 层粘连蛋密(碳)、1V型菠愿(colllV)影响 4．放免法测定细胞培养液中LN、湖Ⅳ的含量 实验结果 1．高糖对腹膜间皮细胞LN、c0】lⅣ合成的影响呈浓度依赖 性。 24 h， (1)葡萄糖浓度为2．5％、4．25％的培养液刺激PMCs 球分别增加2，7倍、7．3倍(PO．O005)。 (2)猿莓糖浓度为1，5％、2．5％、4．25％的培养液刺激PMCs 24 ’ 0001)。 ．2· 成亦增加，且有显著意义。 3．1txmmoI／L PMA可使PMCs LN、tolllV合成增加PAM组与 00001)。 4+G66976抑制了PMA对LN、coilⅣ的合成的影响。 PMCs暴露于20txmmol／LG右6976的培养液30分钟后再予 PMA24h IilmmoL／L LN、colllV无明显增加(P0．05)。 讨 论 一、腹膜间皮细胞的体外培养及鉴定 采