高糖环境对豚鼠膀胱ICC样细胞c-kit mRNA和蛋白的表达影响.pdfVIP

摘 要 目的：观察体外高糖环境培养的豚鼠膀胱cajal 样间质细胞c-kit 基因mRNA 及蛋白的表达变化，探 讨高糖环境对 cajal 样间质细胞及 SCF/c-kit 信号通路传导的影响，为下一步细胞功能学的逆转及恢 复细胞表型等研究提供前期证据。 方法：本实验应用胶原酶酶解法，培养出体外环境中高糖状态下的Cajal 样间质细胞，观察高糖环境 下豚鼠膀胱 Cajal 样间质细胞形态学变化，采用 RT-PCR 方法检测膀胱平滑肌组织不同高糖浓度下 Cajal 样间质细胞c-kit 基因mRNA 表达量的变化；采用激光扫描共聚焦显微镜测定c-kit 基因Cajal 样间质细胞蛋白的表达变化。 结果： RT-PCR 电泳结果经半定量分析显示高糖组培养的ICC样细胞C-kit mRNA转录明显较正对照 组及无糖组降低（P0.01 ），高糖组中15 mmol/L组及30 mmol/L组 c-kit mRNA转录无明显差异性 （P0.05 ），60 mmol/L组与15 mmol/L及30 mmol/L组比较可见c-kit mRNA转录明显降低；膀胱Cajal 样间质细胞c-kit蛋白阳性染色为绿色荧光，经波长为488 nm 的激光激发后观察显示15 mmol/L、30 mmol/L组、60 mmol/L组胞膜蛋白表达较正常对照组减弱，有明显差异性（P=0.00 ），各高糖组组间 蛋白表达无明显差异（P0.05 ）。 结论： 高糖环境可造成Cajal 样间质细胞c-kit 基因mRNA 及蛋白表达水平明显较正常对照组降低， 提示其转录和翻译水平异常可导使Cajal 样细胞失去SCF/c-kit 信号通路异常，导致Cajal 样间质细胞 功能及结构障碍，在分子生物学立场上证明了高糖环境对ICC 样细胞及SCF/C-kit 信号传导的影响， 从而导致高糖环境下膀胱逼尿肌中SCF/C-kit 信号通路异常，ICC 样细胞形态、分布及功能缺陷，进 而推断其可能是糖尿病膀胱病变形成的机制之一，为DCP 发病机制的研究及寻找新的治疗手段提供 理论依据，证明其可能是糖尿病膀胱病变（diabetic cystopathy ，DCP ）的发病机制之一。 关键词： Cajal 样间质细胞；c-kit 基因；高糖；糖尿病 论文类型：A （应用研究） I Abstract Purpose: We investigate the influence of the SCF/c-kit signal pathway in high glucose by observe he expressions of interstitial cells of Cajal-like(ICCs) of c-kit mRNA and protein in the bladder of guinea pig in high glucose in vitro and to found the prophase evidence to odeteriorate the cell functions and recovery the cell phenotype. Methods: In this experimental ,we can get the cajal-like interstitial cells by enzyme digestion method in high glucose treatment in vitro.To observe the change of morphology of interstitial cells of Cajal-like in high glucose treatment in vitro and we put the glucose into culture media for cells culture. expression of c-kit mRNA was detected by reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR), and