高糖环境对豚鼠膀胱Cajal样细胞形态、超微结构的作用.pdfVIP

摘 要 目的： 通过观察高糖环境下豚鼠膀胱 Cajal 样间质细胞 (interstitial cells of Cajal ，ICCs) 形态及超 微结构的变化，探讨高糖环境对豚鼠膀胱Cajal 样间质细胞的影响。 方法： 酶消化法原代培养豚鼠膀胱 Cajal 样间质细胞，采用透射电镜观察在不同葡萄糖浓度（5、 10、15mmol/L）不同时间段 （24 、72h ） 体外培养的 ICCs 样细胞的超微结构；采用激光共聚焦 显微镜成像技术测量 Fluo-4AM 负载后的 Cajal 样间质细胞长度并记录其胞内钙离子荧光强度的 变化。 结果： 透射电镜观察到随糖浓度增高和培养时间延长，ICCs 样细胞内细胞器明显减少，线粒体大 小不等，数量减少，肿胀、空泡样改变甚至溶解，内质网扩张、空泡样变，胞质广泛溶解，突起消 失；电镜下还观察到部分膀胱Cajal 样细胞间具有细胞间桥样结构；高浓度长时间培养下的 Cajal 样 细胞染色后出现染色深浅不同的两类细胞，染色浅的细胞中出现微丝素成份，而染色深的细胞则出 现了细胞液化坏死。运用激光共聚焦显微镜成像技术连续扫描和测量 Cajal 样细胞长度，见体外原 代培养的膀胱 Cajal 样间质细胞随糖浓度增高， ICCs 样细胞内钙离子荧光值：5mmol/L/24h 组和 5mmol/L/72h 组并无明显差别；与 5mmol/L/24h 组相比，10mmol/L/24h 组是升高的，而 15mmol/L/24h 组则降低； 10mmol/L72h 组和 15mmol/L/72h 组都是升高的，但 15mmol/L/72h 组 较 10mmol/L/72h 组低，开始出现下降趋势。ICCs 样细胞长度：5mmol/L/24h 组和 5mmol/L/72h 组 并无明显差别；24h 组随糖浓度增高，10mmol/L 组和 15mmol/L 组 ICCs 样细胞长度逐渐缩短； 72h 组随糖浓度增高 10mmol/L/72h 组细胞长度增长，而15mmol/L/72h 组细胞缩短。 结论：高糖环境可对豚鼠膀胱 Cajal 样间质细胞造成形态学和超微结构的破坏，导致细胞钙离子内 流发生异常，造成Cajal 样间质细胞起搏功能减退或消失，这可能是DCP 发病的重要原因之一。 关键词： Cajal 样细胞；高糖环境；钙离子；超微结构； 论文类型：R6 （应用研究） Abstract Purpose: To explore the damage caused by high glucose environment in the way of observing guinea pig bladder ICCs’ morphologic and ultra structure changes in high glucose environment. Methods: With collagenase digestion in vitro, we get the primary culture ICCs body outside. The ultra structure of ICCs was observe by transmission electron microscope in different glucose concentrations (5,10,15mmol/L) and different times(24,72h), while take Fluo-4AM loaded ICCs, record their length and the variety of calcium ion by confocal laser scanning technology . Results: With increased g