高糖损伤内皮细胞及其与SelS及蛋白激酶C的关系.pdfVIP

高糖损伤内皮细胞及其与SelS和蛋白激酶C的关系 硕士研究生： 于振乾 指导教师： 杜建玲教授 指导小组： 门莉莉讲师 专业名称： 内科学 摘要 Vein Umbilical 目的：观察高糖和波动性高糖干预人脐静脉内皮细胞株(Human Endothelial 量和超氧化物歧化酶(Superoxide (Proteinkinase kinase Ca，PKCa)、蛋白激酶CD2(Protein 路发挥作用，及此通路与SelS的关系，为研究内皮细胞保护策略提供新的研究依 据。 方法： 1．分别用含D．葡萄糖为5．5mM(Normalglucose glucosegroup，IG) glucosegroup，HG)、5．5mM与20mM隔日交替(Intermittent 及含14．5mM甘露醇(Mannitol 2天、7天以 group，MG)培养液中孵育HUVECs 及14天，观察各组细胞形态学变化，取各组细胞上清液，用硫代巴比妥酸法测定 MDA的含量，黄嘌呤氧化酶法测定SOD的活力。 水平的表达。 3．按照方法1干预HUVECs，分别于2天、7天、14天后提取各组细胞总蛋 白，采用Western 结果： 1．细胞形态学变化：细胞分别暴露于含不同浓度葡萄糖的培养液中培养2天 后，在倒置显微镜下观察，NG和MG细胞轮廓清晰，多呈梭形，胞质胞核清晰可 见；HG细胞轮廓尚清楚，胞质增多，胞体增大，呈铺路石样，IG细胞形态与高 糖组相似；7天后，NG和MG细胞形态与2天基本相同，HG细胞数量明显减少， 细胞轮廓模糊不清，胞质明显增多，胞体细长，呈枯树枝样，IG细胞变化更加明 显；14天后，NG和MG细胞形态良好，HG细胞数量减少更加明显，IG细胞变 化较HG更加明显。 P=O．002)。 (P=O．006，P--O．003)。 4．SelS 与NG(0．71±0．02)和MG(O．72±0．03)相比，SelSmRNA表达显著升高(P卸．01， mRNA ±O．03)和MG(O．90±0．03)相比，SelS 和IG组SelS 显著升高(P--O．03，P--O．046)。 2 7天显著升高(P印．03，P=O．04)。 6．PKCot mRNA和蛋白水 mRNA和蛋白水平的表达：各时间段、各组PKCot 平的表达均无统计学差异(P0．05)。 7．t,Kcp2 mRNA表达 mRNA表达明显升高(P=O．01，P=O．00； ±0．07)和MG(O．95±O．03)相比，r,Kcl32 和IG组I,],=C132 7天显著升高(P=0．02，P--O．03)。 (P=-O．04，P=O．03)。 结论： 1．恒定和波动高糖均可通过氧化应激损伤内皮，波动高糖的损伤作用更明显； 并有时间依赖性，控制血糖不仅着眼于持续高糖，更重要的是控制波动高糖及早 3 期干预。 2．高糖对内皮细胞的损伤可能与PKCa和PKC[B2通路有关，高糖损伤内