高糖刺激对人脐静脉内皮细胞肾素前体表达的作用.pdfVIP

高糖刺激对人脐静脉内皮细胞肾素前体表达的影响 硕士生姓名： 岳语喃 指导教师： 姜一农教授 指导小组： 路岩教授 专业名称： 内科学 摘要 背景： 动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)是严重危害人类健康的疾病，迄今其 机理的研究已进行了数十年。目前一致认为，内皮功能紊乱和炎症反应在AS的形 成过程中发挥极其重要的作用。许多危险因素可导致内皮功能紊乱，激活一系列 信号通道蛋白，促进AS的发生发展。肾素一血管紧张素系统(RAS)是心血管系统 的主要调节系统，其过度激活可通过升高血压、氧化应激、炎症反应、致内皮细 胞功能紊乱等方式促进动脉粥样硬化的形成。既往认为，经典RAS系统中，肾素 I)，进而生成血管紧 的作用是将血管紧张素原(Aog)转化为血管紧张素I(Ang 张素II(AngII)发挥主要效应，而肾素前体则无任何生物学活性。近年来，随着 肾素(前体)受体[(pro)renin 有了更深刻的认识。一系列研究表明，肾素或肾素前体与(P)RR结合后可以发挥 II的病理生理学作用，使肾系膜细胞增殖，系膜 不依赖于经典的RAS所产生的Ang 基质增多，血管平滑肌细胞迁移等作用，导致实验模型出现血压升高、蛋白尿、 肾小球硬化等病理生理改变。本课题组前期实验证实肾素(前体)及其受体在人 脐静脉内皮细胞(HUVEC)有表达并发挥重要作用。 高血糖已被证实是动脉粥样硬化最重要的危险因素之一。高糖可刺激细胞表 面葡萄糖转运蛋白(GLUT)表达增加，进一步激活细胞内多种信号转导及炎症因 子的表达。目前已有实验证实高糖刺激可使得人肾小球系膜细胞RAS活性明显增 高，肾素、肾素前体、血管紧张素原、血管紧张素转化酶等表达增加。高血糖可 导致内皮功能紊乱，使局部肾素表达增高，炎性因子表达增多，但是高糖刺激对 内皮细胞肾素前体表达的影响尚未被报道。本实验将通过模拟高血糖环境，观察 人脐静脉内皮细胞肾素前体表达的变化。 目的： 的表达情况以及上清液中肾素前体浓度变化。 方法： 1．体外培养原代HUVECs。 2．选择状态良好的2-3代人脐静脉内皮细胞(刖vEC)，分为空白组、正常葡 萄糖浓度组、高浓度葡萄糖组1、高浓度葡萄糖组2，分别给予葡萄糖浓度OmM、 5mM、25mM、40mM刺激，观察HUVEC中肾素前体mRNA的表达变化。 3．为观察渗透压变化对内皮细胞造成的影响，设立甘露醇对照实验组。分别 化。 4．选择状态良好的2-3代人脐静脉内皮细胞(删、，EC)，给予葡萄糖浓度40mM 间下，删VEC中肾素前体mRNA的表达变化。 5．上述收集的肾素前体mRNA用RT-PCR进行检测。 6．细胞培养上清液中肾素前体用ELISA试剂盒进行检测。 结果： 1．与空白组相比，正常葡萄糖浓度(5raM)未造成肾素前体mRNA表达明显增 加；高浓度葡萄糖刺激可造成肾素前体mRNA表达明显上调，尤以40mM组为著。 2．设立的甘露醇对照实验组，没有表现出明显变化。 现一定的时间依赖性。 4．高糖刺激下HUVECs培养液中，肾素前体的浓度升高并呈现时间依赖性。 结论： 1．葡萄糖可刺激HUVEC肾素前体mRNA表达明显上调，具备浓度依赖性。 2．渗透压的变化并未对内皮细胞肾素前体mRNA表达造成明显影响。 3．高浓度葡萄糖刺激可造成肾素前体mRNA表达明显上调且具备时间依赖性。 4．高糖可刺激HUVEC分泌肾素前体增多，并且呈现时间依赖性。 关键词：HUVEC高浓度葡萄糖肾素前体mRNA 2 of tothe of in of dose Effect glucoseexpressionprorenin high