高糖对视网膜色素上皮屏障及转运功能的影响.pdfVIP

高糖对视网膜色素上皮屏障与转运功能的影响 摘 要 目的 RPE有多种功能，如构成视网膜外屏障、主动转运液体、分泌一系列细 胞因子等。在糖尿病时上述功能均可发生变化，直接或间接参与黄斑水肿的 发生，屏障功能与液体转运功能比较直接影响到黄斑水肿，因此本研究拟观 察在高糖环境下RPE的通透性、紧密连接以及主动转运功能的改变，以探讨 视网膜外屏障在糖尿病黄斑水肿中的作用，为探索有效的治疗方法提供理论 依据。 方法 1用ARPE一19细胞系，培养在Millicell HA滤膜上，建立视网膜外 屏障模型。 的跨上皮电阻(TER)与对辣根过氧化物酶(HRP)的通透性。 3 RT—PCR检测在不同糖浓度的培养基中生长的细胞紧密连接与液体 B N矿K—ATPaseⅡI、Na—K-ATPase l、P2Y2的基因表达情况。 4 WesLern B 的蛋白表达情况。 结果 1外屏障模型的建立：培养在Millicell HA滤膜上的ARPE．19细胞 约2周后TER稳定，外屏障模型成功建立 2在不同浓度葡萄糖培养基中生长的细胞，TER有不同的改变。处 较大，l、2周时与对照组相比，差异有极显著性，P0．001；3周 时差别减小，但仍有显著性(P=0．013)；4周时则差异无显著性 (P=-0．101)。 3不同糖浓度中生长的RPE通透性变化：处理后各组在不同时间段对 HRP的通透性与对照组相比，均有显著差异，P0．05 4 RT—PCR：不同的糖浓度在不同时期对各种因子的影响不尽相同，对 化幅度不同，但总的趋势是高糖环境下短期内表达上调，随着时间 B 延长，上述因子表达下降；高糖上调Na-K—ATPase l的表达，ZO．1 经过短暂上调后明显下降；观察期内高糖对B．catenin的影响不大。 5 Westernblot：蛋白的表达水平变化与mRNA的变化趋势相似，高 组的表达水平下降，低于对照组；高糖上调Na—K-ATPaseB的表达， 而对8一catenin影响不大。 结论 1 高糖影响视网膜色素上皮的屏障功能，改变细胞间离子流动与 化学物质弥散情况，但两者变化幅度不全相同。 2高糖对视网膜色素上皮紧密连接相关因子产生不同的影响，并 且随作用时间的延长，表达水平改变情况不同。 3高糖改变RPE主动转运功能。 关键词：视网膜色素上皮；外屏障；紧密连接；通透性；主动转运 EffectsofGlucose of onBarrierAndActiveTransportation Retinal human Epithelium Pigment Abstract objecfive