高级蛋白氧化产物对人脐静脉内皮细胞的运用.pdfVIP

高级蛋白氧化产物对人脐静脉内皮细胞的作用 中文摘要 目的：肾脏替代疗法(包括血液透析、腹膜透析等)为-3今最成 功的脏器功能替代疗法，全世界目前约有一百万尿毒症患者依赖透析 疗法维持生命，且这个数字正以每年9％左右的速度递增。然而，心 血管并发症、感染、肿瘤、蛋白营养不良等也相当普遍。这一切不仅 影响了尿毒症患者的生活质量，也大大降低了其平均期望寿命。目前 大量证据已证实慢性肾功能衰竭(CRF)伴随有多因素的免疫炎症综 合征，这种免疫／炎症系统的异常在肾功能减退的早期即已出现，随 着肾功能的恶化而日益严重，至透析期间尤为明显。很多因素都参与 了免疫／炎症系统的异常，如糖代谢异常、脂肪代谢异常、氧化一抗氧 OXidatiOil 化体系失衡等。近年来高级蛋白氧化产物(Advanced s)渐引起人们的关注。最近一系列的研究 proteinproduction，AOPP 都显示AOPPs在慢性肾功能衰竭时明显升高，不仅是反映氧化应激的 新指标，同时也是一种重要的炎症介质。然而，迄今为止关于AOPPs 对于内皮细胞、血管平滑肌细胞以及人体其它靶细胞的生物学效应研 究甚少。我们以体外制备的AOPP—HSA(高级蛋白氧化产物修饰蛋白) 作用于人脐静脉内皮细胞，观察其对于细胞增殖、炎症因子／黏附分 子表达的影响；并以维生素E作为干预措施初步探讨其中的作用机 制。 HSA内形 氯酸处理，简述如下，将次氯酸按20mmol／1加到60mg／mI 内透析，直至以碘法检测透析液中无次氯酸为止。随后在A。。。下测定 浓度，AOPP-HSA的浓度以氯胺T的浓度表示。 实验分组 实验中人脐静脉内皮细胞(ECV304)分为正常对照组 (含1 0％ o％小牛血清的1640培养基)、不同浓度AOPP—HSA组(在1 小牛血清的1640培养基中加入AOPP-HSA，使其终浓度分别为 50umol／l、1 600umol／1)、HSA组：(HSAn组：(血管紧张素 50ug／m1)、hng II 1 1 0。mol／1)、和维生素E干预组(VitE00ug／ml预先孵育12 400umol／1)。 观测指标分别用MTT法和AnnexinV／Pi—FITC流式细胞仪检测 法观察AOPP—HSA不同作用时间、不同作用浓度对内皮细胞增殖和凋 亡的影响。以流式细胞仪检测内皮细胞表面细胞间黏附分子一1 (ICAM-I)和E一选择素(E-Selectin)表达情况。采用ELIsA法测 定细胞培养上清液中单核细胞趋化蛋白一1(MCP-1)的含量。以逆转 0、P65 录一聚合酶链反应(RT—PCR)半定量检测细胞中核转录因子P5 和I—KB的mRNA表达含量。 结果： (1)AOPP—HSA与内皮细胞共同孵育后，可使内皮细胞的 o％～8 增殖指数下降(p0．05)，约为正常对照组的7o％。这种下降 为随着浓度的升高，其增殖指数呈逐渐下降趋势。而单纯HSA纽与正 常对照组之间无明显改变，差异无显著性(p0．05)。凋亡试验结果 4 发现：AOPP—HSA00umol／1处理组的内皮细胞，活细胞(LL％)较正 常对照组下降了约25％，而早期凋亡(LR％)则较正常组升高17％(P 值均O．05)。提示AOPP—HSA对内皮细胞增殖的影响部分是通过诱导 早期凋亡所致。 皮细胞与AOPP—HSA共同孵育24小时后，两者的表达均有上调，但不 同浓度各组之间的差异在统计学上均无意义。内皮细胞经单纯HSA和 AngII刺激后，ICAM一1的表达虽似有明显增