高胆固醇血症小鼠肾脏P选择素表达的探究.pdfVIP

中文摘要 前—{r一 近年来大量动物实验及临床研究已证明高脂血症与肾脏损害 之间存在密切关系。给正常动物喂养高胆同醇饲料诱导高胆固 醇血症，肾脏可以发生一系列病理形态改变，其中特征性表现 之一是单核／巨噬细胞在肾小球及间质的浸润，但其浸润机制尚 ／fi清楚。P选择素是粘附分子选择素家族中的主要成员，率要在 活化血小板、内皮细胞膜表面表达，并介导血小板和血管内皮 细胞与中性粒细胞、单核细胞粘附，在病变部位炎症细胞没润 中起关键作用。本实验在建立高胆固醇血症动物模型基础上， 通过免疫组化技术检测实验动物肾脏P选择素表达，探讨高胆 固醇血症肾脏损害中炎症细胞浸润的机制，进一步探讨脂质肾 毒性损伤的机制。 、～、f ／材 料 ＼． 龄。 2、兔抗小鼠P选择素多克隆抗体试剂盒，购自武汉博士德 公司。 3、胆固醇、胆酸购自沈阳化学试剂厂-分装站。 方 法 1、高胆周醇m症动物模型制备 采川完全随机方法将12只雌性C57／BL小鼠分为实验组(6 、 年i1 1 。丈验川小鼠1：tI}I进食、饮水，制备成高月}『…孵m痢：动物儆J‰ 5川¨、j(从l|f：’删【|‘『；…窖以i 刈照川小鼠进食ff通训利。丁实验第1 ¨之¨j72起)进行仃父{iJl充。 2、榆测指标：(1)f觚脂：于实验结束时从小鼠球后静脉墩 向．1毫升检洲血消总胆固醇(Tch)，甘油三瞧(TG)，低密度脂 蛋白胆固醇(LDL—c)(酶法测定)。(2)肾脏病理学检查：实验 1 5周末，摘取右肾，切片分别进行HE、PAS染色，观察肾小球 及肾小管、肾间质的损伤情况，并进行肾组织形态定量分析。 (3)肾组织P选择素表达：用免疫组化方法(SABC法)观察 P选择素在两组小鼠肾组织的表达。 结 果 l、脂质浓度的变化：实验组小鼠血浆总胆固醇(Tch)和 低密度脂蛋白胆固醇(LDL．C)浓度于实验结束时显著高于对照 组(P0．05)，表明高胆固醇血症动物模型制备成功。 2、病理形态学观察：实验组于PAS染色下可见肾小球细胞 数增多，系膜细胞轻度增生，系膜基质增宽，肾小球体积增大， 肾小球可见少量单核细胞浸润，肾小管上皮细胞轻度空泡变性， 问质无明显变化。肾脏组织形态定量测定显示实验组小鼠肾小 球细胞数显著高于对照组(P0．05)，PAS染色阳性部分(即系 膜区)川肾小球面积比显著高于对照组(P0．01)。 3、免疫纰化：P选择素在正常小鼠肾绀织不表达，在实验 纰小鼠’肖小球及问质小农达，在’行小管㈠史细胞明娃发达。 讨 论 本实验通过对J缸脂的检测证明我们已经成功制备J，高胆同醇 『f『I癖动物模型。并通过对肾脏组织学观察证实了饮食诱导的高胆 吲醇向．症可以导致正常动物肾脏一系列病理形态学改变。 P选择素是粘附分子选择素家族的重要成员之一，主要在活 化血小板，内皮细胞膜表面表达，介导炎症细胞在炎症区域的浸 润，在肾脏疾病的发生中起关键作用。本研究结果表明，P选择 素在高胆固醇血症小鼠肾小球不表达，提示在高胆固醇血症所致 的早期肾小球轻微损害中，P选择素无重要作用。 本研究结果显示P选择素在高胆固醇血症小鼠肾小管上皮细 胞明显表达，这不仅反映小管上皮细胞受刺激时的激活状况，还 提示P选择素可能是小管上皮细胞的一个活化标志。在高胆固醇 血症肾损害中肾小管P选择素明显表达而肾小球无表达，明显提 示高胆固醇血症所致的小管间质损害可能由受损小管上