三个先天性白障家系致病基因的鉴定.pdfVIP

目录 摘要4 Abstract6 前言8 目的与方法10 实验结果18 三个先天性白内障家系的临床检查结果 18 PCR 产物凝胶电泳图21 DNA 测序分析结果22 讨论24 结论30 参考文献31 综述错误!未定义书签。 三个先天性白内障家系致病基因的鉴定 摘要 研究目的：通过对三个先天性白内障家系（CAT-001、CAT-002 和 CAT-003 家系）进行候选致病基因的排查,以寻找其致病基因及其突变位点，明确该三个 家系的致病分子基础。 研究方法：将患有先天性白内障的三个家系纳入研究，对所有成员进行全面 的眼部检查，明确其先天性白内障表型；采集这些家系成员的外周静脉血，采用 Wizard Genomic DNA Purification 试剂盒从外周静脉血中提取及纯化基因组 DNA；以家系先证者基因组 DNA 为模板，聚合酶链反应（PCR）扩增 10 个白内障 候选致病基因的突变热点区域，PCR 产物纯化后进行直接 DNA 测序筛查突变位点。 一旦发现可疑突变位点，则采用直接 DNA 测序的方法在其他家系成员进行疾病与 致病突变共分离分析，进一步确认其是否为致病性突变位点。 研究结果 ：先天性白内障三个家系 CAT-001、CAT-002、CAT-003 的发病率 明显高于一般人群，每代均有患者且无性别分布上的差异，因此确定此三个家系 的遗传方式为常染色体显性遗传。CAT-001 家系患者的表型为先天性核性白内 障，在该家系患者的 CRYGD 基因第 2 个外显子上存在一些杂合性突变 c.C70A， 该突变为错义突变，导致一个 CRYGD 蛋白第 24 位的脯氨酸被苏氨酸取代 （p.P24T）；CAT-002 家系患者的表型为先天性绕核性白内障，在该家系患者的 CRYBA1 基因第 3 个外显子上存在剪接突变 CRYBA1(IVS3+1 GA），使 hnRNA 的剪 切和拼接异常，引起 ß-A1 晶状体蛋白结构异常而导致先天性白内障的发生。； CAT-003 家系患者的表型为先天性核性白内障，在该家系患者的 CRYBA1 基因编 码序列第 272-274 位上缺失 3 个碱基 GAG，故其所编码肽链第 91 位甘氨酸丢失 （p.G91del），蛋白结构及功能因此改变而发病。 研究结论：先天性白内障家系 CAT-001 遗传方式为常染色体显性遗传，其表 型为先天性核性白内障，CRYGD （p.P24T）错义突变是 CAT-001 家系的致病分子 基础；先天性白内障家系 CAT-002 遗传方式为常染色体显性遗传，其表型为先天 性绕核性白内障， CRYBA1 剪接突变 (IVS3+1 GA）是 CAT-002 家系的致病分子 基础；先天性白内障家系CAT-003 遗传方式为常染色体显性遗传，其表型为先天 性核性白内障，CRYBA1 缺失突变（p.G91del）是CAT-003 家系的致病分子基础。 关键词：先天性白内障,晶体蛋白基因,表型,CRYGD;CRYBA1,突变 Abstract Objectives: Screening the sequence of candidate gene to identify the virulence gene and the mutant site of three Chinese congenital cataract families (CAT-001, CAT-002 and CAT-003). Clarify the pathogenic molecular basis of these three ADCC families. Methods: Collect three Chinese congenital cataract families for this study. detailed clinical examination for the family members to determine the phenotype of cataract. Extract and purify the genomic DNA from peripheral blood of proband via Wizard Genom