上调miR-21对HT-29细胞生物学行为及对5-FU及放疗敏感性影响.pdfVIP

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2017-09-06 发布于贵州
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上调miR-21对HT-29细胞生物学行为及对5-FU及放疗敏感性影响.pdf

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上调miR-21对HT-29细胞生物学行为及对5-FU及放疗敏感性影响

中文摘要中文摘要目的：研究miR．21对大肠癌HT-29细胞生物学行为的影响，观察细胞对5．Fu 及放射线敏感性的变化。方法：转染pre—miR一21慢病毒组为实验组，HT-29细胞组为空白对照组，转染无义序列NC慢病毒和U6慢病毒为阴性对照组。构建pre．miR．21慢病毒载 Real-timePCR检测转染前后miR-21 体，荧光显微镜下评估转染情况，Taqman 表达变化，采用CCK-8法检测miR-21对细胞增殖能力影响，流式细胞仪检测细胞转染前后细胞周期分布情况及凋亡能力，细胞克隆形成实验检测细胞克隆形敏感性变化，并计算各组半数抑制率(IC50)，MMT法检测细胞对放疗敏感性。每项实验至少重复3次。 VS375．67士21．0】促进HT-29细胞增殖(p0．01)；克隆形成能力显著增强(559士19 VS6．67士0．81)％，晚 p0．01)；细胞凋亡减少(口0．05)，早期凋亡(1．1士0．26 VS 期凋亡和死亡细胞(1．33土0．855．53士I．1)％；细胞周期重新分布，G0／G1期向 VS S期转换，G0／G1期细胞比例明显降低(36．53+0．92 60．18士0．93)％(pO．01)， vS S期细胞比例升高(56．8士1．02 VS 差异；细胞体外侵袭能力增强(穿膜细胞数104．8士6．72 34．2士2．59，p0．01)； miR．21抵消部分5．FU化疗作用使化疗敏感性降低，上调组IC50 (232．73士21．69肚g／m1)是空白对照组(112．46+1 VS 细胞对x线放疗抑制率降低(16．76士1．8736．1411．54)％(p0．05)。能够抑制肿瘤细胞凋亡，促进细胞增殖能力、克隆形成能力及体外侵袭性，增加肿瘤细胞对5-FU及放射线的抵抗力。关键词：慢病毒载体miR-21HT-29细胞耐药 Abstract ABSTRACT the of miR—-21 onthe Objective：Toinvestigateimpactup·-regI．dating biological ofHT-29cancercellsandobservethe of to5·FUand behaviors sensitivity changes radiotherapy． Method：wefirsttransfectedwithLentiviral 1 asthe vector-pre·-miR··2 vector-NC wetransfectedthenonsense lentiviral experimentalgroup，then seq