人参总皂苷对大鼠骨髓间充质干细胞向胰岛样细胞分化的作用.pdfVIP

目 录 1 人参总皂苷对大鼠骨髓间充质干细胞向胰岛样细胞分化的影响 …………………………………………………………………1 1.1 中文摘要………………………………………………………1 1.2 英文摘要………………………………………………………4 1.3 前言……………………………………………………………7 1.4 材料与方法……………………………………………………10 1.5 结果……………………………………………………………28 1.6 讨论……………………………………………………………35 1.7 结论……………………………………………………………40 1.8 参考文献………………………………………………………41 1.9 英汉缩略词对照表……………………………………………45 2 致谢……………………………………………………………47 3 骨髓间充质干细胞对1 型糖尿病的治疗作用 （综述）……48 人参总皂苷对大鼠骨髓间充质干细胞向胰岛样细胞 分化的影响 摘 要 目的：通过链脲佐菌素（STZ）作用于大鼠胰岛细胞株（INS-1） 建立体外大鼠INS-1 胰岛细胞损伤模型后，应用Transwell 共培养体 系与大鼠骨髓间充质干细胞（BM-MSC ）间接共培养，同时加入不同 浓度的人参总皂苷（TSPG ）干预，观察人参总皂苷对BM-MSC 向胰 岛样细胞分化的影响，并初步探讨其机制。方法：体外分别培养INS-1 细胞和BM-MSC ，取生长状态良好的INS-1 接种于Transwell 培养板 下层，生长达 80-90 ﹪融合后，用无血清培养基同步化24h ，再予不 同浓度的STZ 干预 24h ，通过观察细胞形态及丙二醛（MDA ）的测 定，选择合适的浓度来建立胰岛细胞损伤模型，随即分为5 个组：（A ） 单纯 BM-MSC 培养组；（B ）BM-MSC+INS-1 共培养组；（C ）BM- MSC+INS-1+低浓度人参皂苷组；（D ）BM-MSC+INS-1+中浓度人参 皂苷组；（E ）BM-MSC+INS-1+高浓度人参皂苷组。各组培养液相同， 均为含胎牛血清的50 ﹪1640 培养基+50 ﹪DMEM-L 培养基，其中B、 C、D 、E 组的BM-MSC 均接种于Transwell 板上层。共培养9 天后 用双硫腙染色初步鉴定诱导后细胞，并提取诱导后细胞总蛋白及总 RNA ，用Western-Blot 检测各组细胞内PDX-1 蛋白含量，用RT-PCR 检测特异性胰岛素基因的表达水平。结果：（1）胰岛细胞损伤模型的 建立：不同浓度的STZ 干预细胞24h 后，细胞丙二醛（MDA ）含量 1 逐渐增加，并且在 0.8mg/ml 的浓度时增加更为显著，呈现出了明显 的细胞损伤效应。（2 ）双硫腙染色鉴定诱导后细胞：单纯 BM-MSC 培养组不能被染色，其余各组均不同程度地被染为棕黄色，表明诱导 后细胞的细胞质中富含锌离子，证实有胰岛素分泌细胞的存在。（3 ） 实验各组PDX-1 蛋白表达水平的变化：单纯BM-MSC 培养组无PDX- 1 蛋白的表达，其余各组诱导后细胞均有表达，而其中人参皂苷组较 无人参皂苷组表达水平有不同程度的升高，差异具有统计学意义（P ＜0.05 ），且随着人参皂苷浓度的升高，PDX-1 蛋白的表达呈现增高 趋势。（4 ）实验各组胰岛素基因表达的变化：单纯BM-MSC 培养组 无胰岛素基因无表达，其余各组诱导后细胞均有表达，其中人参皂苷 组较无人参皂苷组表达水平有不同程度的升高，差异具有统计学意义 （P ＜0.05 ），且呈现浓度依耐性。（5 ）葡萄糖刺激实验：将诱导后细 胞分别在含5.6 mmol/L 和 16.7 mmol/L 葡萄糖的培养基中体外培养 2 h ，采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定上清中的胰岛素水平。单纯 BM-MSC 培养组细胞培养液上清中无胰岛素释放，而共培养组诱导 后细胞在16.7 mmol/L 高糖浓度刺激后胰岛素释放水平较5.6 mmol/L 基础糖浓度明显增加（P 0.05 ）。结论：（1）0.8mg/