人参皂甙Rb1对低氧性大鼠肺动脉平滑肌细胞SERT及5-HT1BR表达及细胞增殖的影响.pdfVIP

目 录 (一)论 中文摘要……………………………………4 英文摘要……………………………………6 0 前 言…………………………………。．1 2 材料与方法…………………………………1 结 果…………………………………．．23 分析与讨论…………………………………33 结 论……………．…………．…………36 参考文献…………………………………．．37 (三)附 (四)致 (五)综述及参考文献………………………………44 (六)声明……………………………………．．55 万方数据 人参皂甙Rbl对低氧性大鼠肺动脉平滑肌细胞SERT和 5-HT，BR表达及细胞增殖的影响 中文摘要 【目的】 观察人参皂甙Rbl对低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonaryartery smoothmuscle IB transporter，SERT)和5一羟色胺1B受体(serotoninReceptor， 5一HT。。R)表达及细胞增殖的影响。 【方法】实验由以下三部分组成： (1)I型胶原酶消化法提取单个PASMCs：用I型胶原酶消化法分离成年 雄性SD大鼠肺动脉平滑肌细胞，进行PASMCs原代培养并传代培养。 倒置相差显微镜下观察原代培养的PASMCs的形态，细胞免疫荧光 法鉴定PASMCs的纯度。将第4’6代生长良好的细胞随机分组：常 时。 经饥饿同步化处理，加入人参皂甙Rbl后，在常氧或低氧条件下培 养24h。采用CellCountingKit一8试剂盒检测低氧和不同浓度人 参皂甙Rbl对PASMCs增殖的影响； 取对数期的PASMCs经饥饿同步化处理，加入人参皂甙Rbl后，在 常氧或低氧条件下培养24h。用逆转录一聚合酶连反应(RT-PCR法) 和免疫印迹法(Western 的mRNA和蛋白水平表达。 【结果】 (1)A．倒置相差显微镜下观察到，细胞呈长梭形或三角形生长，大小 不一，重叠交织排铺。单个或多个细胞核呈卵圆形位于细胞内。培 养至5—7d，培养皿内细胞密度低处呈网格状，密度高处呈栅栏状， 呈现出平滑肌细胞特有的“峰一谷”状生长。 万方数据 B．细胞经Q—actin单克隆抗体孵育、FITC标记的二抗染色和DAPI 复染后，在激光共聚焦显微镜下观察到平滑肌平滑肌a一肌动蛋白 呈现绿色荧光，以纤维细丝状排列；DAPI染色的细胞核呈卵圆形， 发蓝色荧光，阳性率达98％以上。 (2)CCK一8检测结果显示：与常氧组比较，低氧组细胞增生明显增加(