人肿瘤坏死因子内含子对其基因表达影响的初步探究.pdfVIP

人肿瘤坏死因子内含子对其基因表达影响的初步研究 中文摘要 【目的】 necrosis 肿瘤坏死因子0【(tllmor f．actor．Q，TNF．Q)是由激活的巨噬细胞产生的 一种多功能细胞因子，其最显著的特征是在体内外能直接杀伤肿瘤细胞，是一种 具有潜在应用价值的抗肿瘤生物制剂。使用染色体组TNF．a全长基因(含三个 内含子)和cDNA基因构建真核表达载体，并转染真核细胞，观察外源TNF吨 表达对细胞内自身TNF．a基因表达的影响；初步探讨TNF．仅内含子对染色体组 TNF—a基因表达的影响。 【方法】 细胞中提取染色体组总DNA，用PCR方法扩增出全长TNF．a基因序列并构建至 真核表达载pcDNA3．1(+)质粒中，挑取正向、反向质粒各一个(把ne0基因 与TNF．acDNA的转录方向一致时的质粒，称为正向质粒；方向相反，则称为反 向质粒)，测序证实后，重组正向质粒载体命名TIA，重组反向质粒载体命名为 和外源性基因的表达情况。用体外诊断试剂盒检测肿瘤坏死因子的蛋白表达量。 【结果】 和K562细胞中成功；TF和T认质粒在细胞内表达，TIB质粒在细胞内不表达； 的表达量比TF质粒转染细胞产生的表达量低。 【结论】 IIl】f矾A表达的量和肿瘤坏死因子蛋白的表达量增加；而导入外源TNF．a全长基 因序列比导入TNF．acDNA序列使细胞内TNF吨IIl】刚A和蛋白表达的量低。 【关键词】 TNF．a；CDNA；内含子；人源载体 2 onEf亿ctsofTNF-QIntron PreliminaryStlIdy toTNF—aGene Expression Abstract 【objec廿ve】 ’n瑚or necrosis multi‰ctional sretedmaCr-o fIactor-a，a cytokinemainly by tovarioustIlmor iIl cells Vivo锄dinVi仃o．Itisa phages，isc叽otoxic directly antitl】mor me potential reagent．Witllm_piddevelopmentofmolecularbiologvtec vectorSwereconstructedtlleTNF．a如n．1e llnique’Euka巧，0ticeXpression using t11ree ttlecDNAwhichwerc廿 ngtllgenomicgelle(includingin仃0璐)aIld geIle aIlsf．ectedinto cells．observedmeeff．ectsof euk锄Dtic exo日enousTNF．仅exp静 ssiononmecell’sown of wouIdbe cXpressionTNF．a群me．TheinveStigation downonme TNF．a in协oIls’mflu衄c岱t0 genOmeexpression． 【Methods】 ExtractedtotalRNAofhu】m锄Hella