人慢性粒细胞白血病小鼠WWOX基因表达水平探究.pdfVIP

摘 要 目的： 通过不同移植方式建立人慢性粒细胞白血病BALB／c小鼠模型， 探讨不同接种方式制备的小鼠白血病模型的生物学特性。研究去甲基 blood 作用及DCA干预前后外周血单个核细胞(Peripheral mononuclear 达水平变化，探讨WWOX基因在慢性粒细胞白血病中的发病机制。 方法： 1．培养人慢性粒细胞白血病细胞株k562，并将细胞浓度调至2× 别以静脉、皮下及腹腔移植方式注射细胞悬液O．2ml。 2．观察小鼠形态表现；每周计数各组小鼠外周血白细胞数量；外 周血、骨髓涂片的细胞学和肝脏、脾脏病理学等形态学检查；流式细 中bcr_abl州刚A的表达鉴定小鼠模型是否成功。 3．用皮下移植方式建立的白血病小鼠进行药物干预观察，待皮下 移植瘤直径至O．5cm时开始用药，将裸鼠随机分为实验和对照两组， 实验组(10只)：白血病模型小鼠腹腔注射地西他滨，干预剂量为 1mg瓜g，药物稀释在O．1mlPBS缓冲液中，干预时间均为3周，每周连 续干预3天。对照组(10只)：在同等条件下白血病模型小鼠腹腔注射 生理盐水O．1ml。 4．观察两组移植瘤的生长情况及外周血白细胞数。 5．用巢式PCR(nested 周后C№白血病小鼠PBMC、移植瘤组织WWOXmRNA表达。 病小鼠PBMC、移植瘤组织WWOX蛋白表达。 结果： 1．静脉接种小鼠在2周左右外周血涂片中可见白血病细胞，存活 时间为(30．4±2．17)d。皮下接种小鼠接种后第4天接种处皮下可 小鼠接种后，小鼠腹腔逐渐隆起，发病后期小鼠腹部隆起的腹腔肿块 及腹水，存活时间(19．6±1．34)d。三种移植方式建立的白血病小鼠 中皮下移植小鼠，可观察到的皮下移植瘤最早，存活时间最长。 2．三种移植方式小鼠外周血白细胞随移植时间逐渐升高，出现大 量白血病细胞，濒死小鼠骨髓细胞检查均可见大量白血病细胞，静脉、 皮下、腹腔不同移植方式小鼠濒死时外周血白细胞数目分别为 ll 表达与内参基因灰度值比分别为O．774士O．103，0．898士O．．109， pO．05)。 3．在皮下移植方式建立白血病小鼠中，实验组皮下肿瘤组织相对 相比，DCA处理组皮下肿瘤体积缩小，差异有显著统计学意义 (t=42．137，尸0．01)。小鼠皮下移植瘤组织病理学观察，实验组肿 瘤细胞体积缩小，细胞核深染，固缩，细胞质见成片的透明样变，对 照组皮下肿瘤细胞排列整齐，胞核大，瘤细胞生长活跃。予以DCA干 预后，实验组小鼠外周血白细胞细胞增长缓慢(15．37士2．56)×10札， 阴性对照组外周血白细胞增长较快(22．63士3．41)×10札，两组计较， 差异有显著统计学意义(卢30．21，氏O．01)。 4．在皮下移植方式建立白血病小鼠中，实验组小鼠外周血、移植 瘤组织检测到WWOXmRNA的表达增加，与内参基因灰度值比分别 为O．865士1．354、1．265士O．187，对照组小鼠PBMCs、移植瘤组织 O．618士O．124，实验组表达高于对照组，差异均有显著统计学意义 t=．22．314，PO．01：t-．28．125，氏O．01)。 5．在皮下移植方式建立白血病小鼠中，实验组小鼠PBMCs、移 植瘤组织WWOX蛋白的表达增加，与内参基因灰度值比分别为 蛋白低表达，与内参基因灰度值比分别为O．354士O．011、O．574士O．010， III 实验组表达高于对照组，差异有显著统计学意义(t=一451．871，尸O．01： 仁一627．142，尸0．01)。 结论： 1．用K562细胞经静脉、皮下、腹腔不同移植方式均能成功建立 人慢性粒白血病小鼠模型。其中，皮下移植小鼠，白血病表现最早(皮 下肿瘤)，存活时间最长，濒死时白细胞计数最高。 2．去甲基化药物DCA能上调慢性粒细胞白血病小鼠PBMCs、移 植瘤组织WWOXmRNA与WWOX蛋白的表达。 3．DCA能够抑制人K562细胞白血病小鼠移植瘤的生长 关键词：K562，白血病模型，移植方式，DCA，甲基化，Wwox