人支气管上皮细胞的获取及培养.pdfVIP

课题来源： 呼吸道上皮细胞立体培养平台的构建及应用；国家科技重大专 项项目；项目编号2014ZXl0004002．007．004。 万方数据 摘要 目的： 建立可靠的人支气管上皮细胞原代培养方法及鉴定技术。 方法： 手术切除的新鲜肺组织，去除支气管外的其他组织，保留主支气管和小的 支气管，使用PBS液充分冲洗后，去除多次的连接组织和淋巴结，只保留气管 软组织，并剪成lxlcm大小的碎片，加入含蛋白酶XIV的消化液中，4。C过夜 消化，收集细胞悬液，接种在包被好TypeI／III胶原的培养瓶中，无血清培养基 进行原代培养。通过倒置显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行鉴定。 结果： 1．蛋白酶XIV消化分离支气管上皮细胞可获得较多单个支气管上皮细胞， HE染色可见纤毛细胞、基细胞。 2．分离的支气管上皮细胞在无血清培养基中生长良好，1天后细胞逐渐贴 壁，细胞小，分布均匀，多成圆形；3-4天后细胞开始逐渐变大、呈多边形；7．10 天生长旺盛，可见成片的扁平状、多边形，呈铺路鹅卵石样分布生长。10天后 生长缓慢、停止生长，细胞逐渐老化，出现空泡。 3．兔抗人的角蛋白8单克隆抗体鉴定原代培养的细胞，胞浆呈棕黄色着色。 结论： 1．蛋白酶XIV低温过夜消化可获得的较多单个支气管上皮细胞。 2．无血清培养基可提供满意的支气管上皮细胞生长条件，提高细胞纯度。 3．角蛋白8单克隆抗体免疫组化染色可简单有效的鉴定支气管上皮细胞。 关键词：支气管上皮细胞；细胞培养；鉴定；人 万方数据 ABSTRACT objective： To areliablehumanbronchial cellsof establish epithelial primarycpLture methodandIdentification． Method： Fresh tissueafter toremovetheother outsidethe lung surgery organizations themainbronchusandsmall PBS after bronchial，retain bronchus，useliquidf肛Lly connectivetissueand trachea washing，removingmgLtiple lymphnodes，onlykeep X1 cmsizeandcutinto inthe tissue，1 pieces，adddigestivejuicecontaining 4℃for cell inthe XIV’the digestion，collectingsuspension，vaccination protease ofthe is I／Ill ina freemedium bottle，serum claLtivationpackagegoodType collagen for in inverted toobservethecell generationprimaryc