人毛乳头细胞中P16基因的检测和意义.pdfVIP

中文摘要 人毛乳头细胞中P16基因的检测及意义 摘 要 目的：毛乳头细胞(dermalcells，DPCs)位于毛囊基底部， papilla 是构成毛乳头的主要间充质细胞，一簇特化的成纤维细胞。体内外具有诱 导毛囊形成的能力成为毛乳头细胞显著的生物学特性。凝集性生长是毛乳 头细胞最明显的特征。毛乳头细胞在毛囊的形态学发生及其周期性生长调 控中处于中心环节，使其成为毛发疾病领域内研究的热点。细胞周期调控 作用于细胞Gl～S期的演进过程。已有研究证明，成纤维细胞进入衰老 时P16基因过度表达，其持续表达导致了细胞衰老。高传代的毛乳头细 胞逐渐失去凝集性生长特性，细胞增殖周期逐渐延长。由此推测可能毛乳 头细胞失去凝集性生长特性可能与P16基因过度表达有关。本实验旨在 real—time chain quantitativepolymerase transcription 从RNA水平检测P16基因表达水平，探讨毛P16基因表达水平与毛乳头 细胞凝集性生长特性之间的关系，揭示体外培养的毛乳头细胞丧失凝集性 生长特性的可能机制，为毛发疾病的I临床治疗提供实验依据。 方法： 1 人毛乳头细胞的分离培养及生长特性观察。采用改良毛乳头细胞 培养法【卜21，获得足够的细胞培养于15％的DMEM培养基中，置于37。C、 湿度、5％的C02培养箱内常规传代培养9倒置相差显微镜观察细胞 及生长状态。 2 muscle Q．平滑肌肌动蛋白(0【．smoothactin，0【．SMA)染色鉴定毛乳 头细胞。 3 应用实时荧光定量PCR法从转录水平检测不同传代次数人毛乳 dehydrogenase，GAPDH)。 3-phosphate 4 运用统计软件SPSSl3．0对数据进行统计处理。 中文摘要 结果： 1 在毛乳头细胞的分离过程中我们采用改良毛乳头细胞培养法，降 低了劳动难度，成功进行了毛乳头细胞的分离培养。分离的毛乳头细胞贴 壁迅速，具有凝集性生长的生长特性。此特性随着传代次数的增多逐渐减 弱，一般6代以后消失。 2 所获得的细胞经免疫组化染色胞浆内表达Q．平滑肌肌动蛋白， 0【．SMA染色呈阳性。 3 实时荧光定量PCR法从转录水平检测不同传代次数人毛乳头细 胞P16基因表达情况。P16基因表达量虽然很微弱，但5代、6代、7代 人毛乳头细胞P16基因表达量随着传代次数增加呈上升趋势。其中6代 与5代相比，表达量有微弱的上升。7代与6代相比，表达量呈明显上升 趋势。 结论： l 我们应用改良毛乳头细胞培养法，用较少的头皮标本成功分离到 充足数量的毛乳头，且体外培养的毛乳头细胞贴壁迅速，a-SMA染色鉴 定呈阳性，6代以前具有凝集性生长特性。 2 P16基因在不同代次体外培养的人毛乳头细胞中表达，表达量随 着传代次数的增加呈上升趋势。 3 人毛乳头细胞呈凝集性生长状态时，P16基因的表达量随着细胞 代次的增加呈轻微的上升趋势；人毛乳头细胞为非凝集性生长状态时， P16基因的表达量随着细胞代次的增加呈明显的上升趋势。 4 P16基因可能在人毛乳头细胞由凝集性生长转化为非凝集性生 长的过程中起了一定的作用。人毛乳头细胞由凝集性生长转化为非凝集性 生长的过程可能与细胞衰老过程相关。 5 实时荧光定量PCR是一种较为灵敏，精确的实验方法。 6 P16基因将来有望成为治疗毛发疾病的崭新靶点。 关键词：毛囊；人毛乳头细胞；凝集性生长；实时荧光定量PCR； P1 6基因 茎查塑墨 一—_—-—-————————_—————_———————————————————一一 Dermal