SUMO化修饰对高糖诱导的肾系膜细胞NF-κB+信号的调控的分析研究.pdfVIP

供新理论。方法：大鼠肾小球系膜细胞(GMC)体外培养，分别给与 不同处理因素，分为以下各组：正常对照组(NC组) ： 含5.6mmol ／L 葡萄糖的培养基 ；高糖干预组（HG1组,HG2和HG3组）：培养基糖 浓度分别为10mmol ／L 、20mmol ／L 和30mmol ／L ；渗透压对照组 （OP组）：培养基含5.6mmol/L葡萄糖和24.4mmol/L甘露醇。各组 细胞培养6、12、24h小时后，用免疫印迹(Western-blot) 、RT-PCR 、 免疫荧光（IF ）激光共聚焦显微镜检测各组细胞SUMO1 、 SUMO2/3 、IKKγ 、IκBα 、NF-κBp65表达及亚细胞定位；用免疫共 沉淀（Co-IP ）和免疫荧光双染共定位检测SUMO1、SUMO2/3分别 与IKKγ 、IκBα蛋白间的相互作用，用RT-PCR检测NF-κB信号下游炎 症因子MCP-1 mRNA表达。3、统计学分析：应用SPSS19.0统计软件 分析数据。数据均以均数±标准差(x±s)表示，组间比较采用单因素方 ¯ 差分析，两两比较采用q检验，检验水准α=0.05，P0.05表示有统计 学意义。结果：1、与NC 组比较，不同浓度高糖作用不同时间均可 上调系膜细胞SUMO1 、SUMO2/3 蛋白和 mRNA 表达（P 均 ＜ 0.05 ）,提示高糖呈时间和浓度依赖性增强SUMO表达；2 、与NC 组 比较，高糖干预组IκBα蛋白表达减弱（均P0.05 ），且具有时间、 浓度依赖效应；但高糖作用后IKKγ 的蛋白和mRNA表达均无显著变 化 （P 均0.05 ）；3 、与NC 组比较，高糖和高渗透压组可减弱 IKKγ 、IκBα与SUMO1 、SUMO2/3之间的相互结合（均P0.05 ）， 但高糖可特异性影响SUMO2/3与IκBα 间的相互作用，与渗透压无 关；4 、与NC组比较，高糖呈浓度和时间依赖性地增强 NF-κBp65蛋 白和MCP-1 mRNA表达（P0.05 ）。结论：1、SUMO1、SUMO2/3 2 在高糖诱导的肾系膜细胞蛋白表达增加，并与IKKγ 、IκBα蛋白间有 相互作用；2 、高糖呈浓度和时间依赖性地减弱IκBα 表达，而对 IKKγ表达无明显影响；3、高糖通过特异性地影响IκBα 的SUMO化修 饰，参与IκBα 降解，活化NF-κB p65及促进下游相关炎症因子表达， 可能是糖尿病肾病NF-κB通路激活的又一重要机制。 关键词：糖尿病肾病；小泛素相关修饰物；核因子-κB ；炎症 3 SUMOylation of NF-κB signaling molecules in Rat Mesangial Cells induced by high glucose Abstract: Objective: Diabetic nephropathy is one of the most prevalent and serious microvascular complications of diabetes. Post - translational modification of proteins by the small ubiquitin-like modifiers (SUMO) has emerged as an important regulatory mechanism for alteration of protein activity, stability, and cellular localization.The latest research demonstrated that SUMO were extensively involved in the regulation of NF-κB pathway,which play critical roles in regulating inflammat