两种子宫内膜异位症大鼠模型血液流变学及单胺类神经递质比较探究.docVIP

两种子宫内膜异位症大鼠模型血液流变学及单胺类神经递质比较探究摘 要：目的：通过对病证结合和单纯疾病两种子宫内膜异位症（EMT）动物模型血液流变学和单胺类神经递质进行比较研究，探索微观量化指标在模型建立中的意义，为中医药治疗子宫内膜异位症提供可靠的研究载体。方法：采用手术移植的方法建立子宫内膜异位症模型，然后在疾病模型的基础上给予多因素刺激建立病证结合子宫内膜异位症模型。测定两种模型及空白对照组的血液流变学及单胺类神经递质并进行比较。结果：（1）与空白对照组相比，病证结合组的全血黏度低切，血沉，血沉方程K值均明显增高，二者比较有统计学差异（P 1.3动物模型的制作 1.3.1 分组及给药将42只大鼠按体重随机分为3组，每组14只：空白组，单纯子宫内膜异位症组（疾病组），气滞血瘀子宫内膜异位症组（病证结合组）。空白组正常饲养；疾病组单纯手术移植子宫内膜；病证结合组在手术移植子宫内膜的基础上，给予多因素刺激进一步造成气滞血瘀的证候。疾病组和病证结合组于术前第5日和术后第10日开始予以灌服己烯雌酚0.02mg/kg，连续5天。术后给氨苄青霉素16万U/ kg，肌注5天。 1.3.2造模方法 （1）EMT造模方法：手术在室温23～28℃环境下进行，无菌操作，以4％水合氯醛(1mL/100g，腹腔注射)麻醉，然后将大鼠固定于手术板上，腹部剪毛，常规消毒，在尿道口上约1cm处切长1.5～2cm的纵形切口进腹。结扎局部子宫血管以及需切除的子宫上下端，切下左侧子宫长约1～2cm，立即放入PBS溶液中，修剪去子宫浆膜外的脂肪组织，纵向切开子宫腔，切取5mm×5mm长的片段，取腹壁血管丰富处，内膜层对着腹壁用5-0号丝线把四角缝合在腹壁上，使其与腹壁紧紧贴合。剩余组织进行组织学检查，以证实移植物为子宫组织，贴合位置尽量远离切口，以减少粘连并防止再开腹时损伤种植的异位内膜。向腹腔注入16万U/kg氨苄青霉素，逐层缝合皮肤和皮下组织。术后让其自然苏醒，动物分笼单放，常规饲养。建模后3周随机取3只开腹检查异位内膜成活与否。 （2）气滞血瘀证造模方法：手术后1周，腹部切口基本愈合后给予以下情志刺激：①用贴有胶布的夹子夹住动物的尾巴，使之保持激怒争斗状态，2min/次，每周1次。②用绷带细带束缚其四肢，使之行走困难，每次30min，每周1次。③食用油1mL/100g灌胃，每周1次。④皮下注射1g/L肾上腺素0.2mL/只，每周1次。以上刺激方法在1周中交替进行。 1.4观察指标及检测方法 1.4.1 大鼠血液流变学指标测定 用北京普利生仪器有限公司生产的LBY-N6K全自动血流变仪。 1.4.2 血清DA测定 多巴胺放射免疫试剂盒由北京华英生物制品研究所提供，严格按说明书操作。 1.4.3血清NE测定 去甲肾上腺素放射免疫试剂盒由北京华英生物制品研究所提供，严格按说明书操作。 1.4.4血清5-HT测定 5-羟色胺放射免疫试剂盒由北京华英生物制品研究所提供，严格按说明书操作。 1.5统计学方法 采用SPSS 16.0软件进行统计学分析，实验数据以（±s）表示，采用单因素方差分析及LSD检验比较各组间差异，P＜0.05为差异有统计学意义。 2结 果 2.1 HE染色结果 将造模成功的异位囊肿和在位内膜以及空白对照组的正常子宫组织按程序做成石蜡切片，HE染色后在光学显微镜下观察。异位囊肿具有与正常子宫内膜相似的结构，因为病理组织为囊状，所以多表现为一个囊腔，内层被覆腺上皮，柱状排列。正常组子宫内膜肌层厚，肌层的血管、腺体丰富，层次清晰。与正常相比异位内膜的结构不完整，肌层薄，平滑肌的环形、纵行结构不清，内膜中腺体、血管相对较少。未发现疾病组与病证结合组异位内膜有明显差异，见插页Ⅴ图1～4。 2.2各组血液流变学指标变化 病证结合模型组与单纯疾病模型组相比，全血黏度高切、中切，全血还原黏度低切、中切、高切，红细胞刚性指数，纤维蛋白原均明显增高，二者比较有统计学差异（P 1