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层析技术习题 选择题关于离子交换的描述下列哪一项不正确： A.离子交换剂通常不溶于水　　B.阳离子交换剂常可离解出带正电的团　　C.阴离子交换剂常可离解出带正电的团　　D.阳离子交换剂常可离解出带负电的团分离鉴定氨基酸的纸层析属于（）A、亲和层析???? B、吸附层析???? C、离子交换层析???? D、分配层析填空题L一定，理论塔板数n愈大，柱效愈 高 。 柱层析法的定量依据是层析峰的 _峰高_ 和 峰面积。 凝胶层析法分离血红蛋白和CuSO4混合液，先流出层析柱的是__血红蛋白___ 根据分离的原理不同分类，层析法主要可以分为吸附层析、分配层析、凝胶过滤层析、离子交换层析、亲和层析等。 凝胶过滤层析是以具有网状结构的凝胶颗粒作为固定相，根据物质的分子大小进行分离的一种层析技术。 离子交换层析是以离子交换剂为固定相，根据物质的带电性质与荷电量不同而进行分离的一种层析技术。 一般讲，柱层析加样量尽量少些，分离效果比较好。通常加样量应少于20%的操作容量，体积应低于5%的床体积，对于分析性柱层析，一般不超过床体积的1%。 名词解释 分配系数 是指溶质在相互接触而互不相溶的两种溶剂中的溶解达到平衡时(1分)，该溶质在两相溶剂中的浓度比(1分)。分配系数是代表物质种属的特征常数，是层析法分离纯化生物大分子的主要依据。在层析技术中，分配系数是指一种化合物在固定相与流动相中的分配达到平衡时的浓度比(2分)。 K=CS/C m=物质在固定相的浓度/物质在流动相的浓度 (1分) Rf值 层析定性实验中，比移值(1分)Rf表示： Rf = 原点至色斑中心的距离 / 原点至溶剂前沿的距离 (3分) Rf值取决于被分离物质在两相间的分配系数以及两相的体积比。由于两相体积比在同一实验条件下是常数，所以Rf值主要决定于分配系数。不同物质分配系数不同，Rf值也不同。对于某种给定的化合物而言，在标准条件下Rf是常数。(1分) 分子筛 利用具有一定孔径的高分子聚合物制成的、主要用于分离分子量不同 的混合物的实验材料和方法(3分)。如PAGE能使混合物按分子量由小到大依次分离(1分)；而凝胶层析则能使混合物按分子量由大到小先后依次分离(1分)。 保留值(retention value) 是表示样品各组分在层析柱中停留时间的长短(保留时间)或组分流出时所需流动相体积的大小(保留体积)。 理论塔板等效高度（height to a theoretical plate,HETP）,当流动相通过柱的一定高度，在离开这段柱时，流动相中某组分的平均浓度与固定相中的平均浓度可以达到分配平衡，完成这一平衡所需要的柱长称为理论塔板等效高度,简称板高，以H表示。 分离度(resolution）——层析分离效能的总指标Rs的定义为：两相邻组份层析峰保留时间之差与两峰基线宽度总和之半的比值，它可在层析图中用下式计算而得： Rs＝(tR2－tR1)/1/2(Wb1+Wb2)=2⊿tR/(Wb1+Wb2) Rs定量地描述了混合物中相邻两组份在层析柱中的分离情况。 柱效率： 混合物被分离的程度(1分)及单组分被洗脱的体积(1分)。一般用塔板数n表示(1分)。两组分tR相差越大、峰宽W越小、塔板数n越大、平衡次数越多，柱效率越高(1分)。 组分被分离的程度（Rs）及单组分被洗脱的体积（Wb）。Rs越大，Wb越小，柱效越高。 可用理论塔板数n或有效理论塔板数和有效理论塔板高度来衡量柱效能的高低。对一定的柱长L而言，每达成—次分配平衡所需的理论塔板高度H愈小，理论塔板数n愈大，柱效能就愈高。 当tR2－tR1的值越大(即两组份的保留值差距越大)，Rs值越大，表示出两峰分得越开，柱分离效能越高，反映了层析作用中的热力学过程。 当两峰的峰宽总和越小(即两峰越窄)，Rs值亦越大，两组份分离越好，越集中，表示柱分离效能越高，反映了层析作用中的动力学过程。 理论塔板数n 塔板理论把层析柱比拟成—个分馏塔，由许多塔板组成。在每个塔板上，组分在两相间达成一次平衡。理论塔板数n就是指物质在柱长L的层析柱中可以达成的平衡次数。对一定的柱长L而言，每达成—次分配平衡所需的理论塔板高度H愈小，理论塔板数n愈大，柱效能就愈高，所以，可用理论塔板数n来描述柱的分离效能。 n=L/H 简述题 DEAE纤维素离子交换层析分离血清混合蛋白质时，采用梯度洗脱法 有何优点？ 为什么 pH 要由高低到低变化而离子强度要由低到高变化？