山莨菪碱对皮瓣缺血再灌注损伤保护机制的实验探究.pdfVIP

中文摘要 山莨菪碱对皮瓣缺血再灌注损伤保护机制的实验研究 摘 要 目的：通过建立大鼠腹部皮瓣缺血再灌注损伤模型，观察山莨宕碱注 射液对大鼠缺血再灌注皮瓣成活面积及组织学变化的影响，并通过测定皮 B的含量，以期证实 皮素(ET)．、肿瘤坏死因子(TNF．a)及核因子呷)一K 山莨宕碱具有防治皮瓣坏死、提高皮瓣成活率的疗效，并为临床防治各种 组织瓣出现的缺血再灌注损伤，提高移植成活率提供新的思路和理论依 据。 方法： l 河北医科大学实验动物中心)，予以编号。 2 实验动物分组：把48只大鼠随机分为三组，每组16只。(1)缺血再 灌注(ischemia IR)组术前3天至术后3天，腹腔注射生理 reperfusion 盐水2ml／kg，3／EI，皮瓣形成后，用微血管夹夹闭腹壁浅动脉发出点近侧 端的股动脉，皮瓣原位缝合，10h后去除动脉夹，恢复血供。(2)山莨宕 碱缺血再灌注处理(Ani—i．schemia Ani—IR)组腹腔注射O．1％ reperfusion 形成后原位缝合，不做其他处理。 3 皮瓣制备方法：动物术前三天应用8％硫化钠进行腹部脱毛，以2％ 75％酒精 戊巴比妥钠(40mg／kg)腹腔注射麻醉。大鼠仰卧，四肢固定， X JJ等描述的方法，于右下腹设计一大小为6cm3cm轴 消毒，按照Pe仃y 形皮瓣，切开皮瓣四周皮肤，仅保留腹壁浅血管为皮瓣轴心，在皮下肉膜 层剥离皮瓣，沿腹壁浅血管向近端分离，找到与股主动脉的交汇点，并向 近端游离股动脉1cm，在此处用微血管夹夹闭股动脉(显微镜下确认股动 脉被完全夹闭)，然后将皮瓣原位缝合。 4 取材：瓜组和Ani．IR组每组取8只大鼠，在皮瓣切开后即刻、去除 血管夹再灌注2小时、8小时及24小时各时间点于皮瓣中段取材，对照 组取8只大鼠与IR组和Ani．IR组同时取材，把所取的皮瓣组织分为两部 中文摘要 分，一部分放入超低温冰箱冰冻保存，待取材完毕后用于生化检测；另一 部分给予4％多聚甲醛固定，待取材完毕后用于做石蜡切片及检测皮瓣中 免疫组化指标；每组剩余的8只大鼠用于肉眼观测术后皮瓣变化情况及7 天后分析测量皮瓣成活率。 5 检测方法及指标： 5．1皮瓣肉眼观察：术后第7天皮瓣成活情况已基本确定，用肉眼观察皮 瓣颜色、温度、质地及出血情况，并进行大致判断。 5．2皮瓣成活率测定：术后第7天用数码相机对皮瓣进行摄像，并把信息 并输入电脑，使用Image．ProPlus．v6．0软件，分析并测定皮瓣成活率(皮 100％)。 瓣成活率=皮瓣存活面积／皮瓣总面积X 5．3皮瓣组织学检查：将制备好的石蜡切片进行HE染色，电子显微镜下 观察组织结构变化情况。 5．4皮瓣组织生化检测：按照不同试剂盒说明书，分别检测不同时刻所取 经考马斯亮蓝蛋白校正。 5．5TNF．Q及NF：KB测定：所取组织进行免疫组化染色，光镜观察TNF． a及NF．K 文分析系统软件，每张切片随机取5个互不重叠的400倍视野，测其阳性 细胞光度值后求其平均数。 差分析法，组间采用q检验，P0．05为差异有统计学意义。 结果： 1皮瓣肉眼观察： 术后第7天，IR组皮瓣除近端少许组织成活，其余绝大部分呈黑褐 色，质地干燥呈痂皮状，无弹性，无毛发生长，触之温度明显较正常皮肤 低，5号注射器针头刺入无出血。掀起皮瓣，可见皮瓣下有较多炎性分泌 物。Ani。IR组皮瓣成活面积明显大于IR组，可见大部分皮瓣生长良好， 水肿较轻，颜色及质地正常，可见毛发生长，皮温较正常，5号注射器针 头刺入可见鲜红色血液流出；仅远端呈暗褐色，质地较韧，无弹性，无出 中文摘要 血