局部浅低温对大鼠全脑缺血再灌注后PTEN表达的作用.pdfVIP

中文摘要 局部浅低温对大鼠全脑缺血再灌注后PTEN表达的影响 摘 要 血管阻断法建立大鼠全脑缺血再灌注模型，观察局部浅低温对大鼠全脑缺 Bcl一2、Bax的表达，探讨浅低温对大鼠全脑缺血再灌注损伤的神经保护 作用。 方法： 1实验分组及动物模型的制备 1．1实验分组 学实验动物中心提供)。随机分成3组：即假手术组(Sham组)，常温脑 组和HI／R组根据再灌注时间的不同(再灌注时间分别为4h、8h、12h、 24h、72h)又各自分成5个亚组。共1l组大鼠，每组6只。 1．2动物模型的制备及实验步骤 用10％水合氯醛350mg／kg向大鼠腹腔注射麻醉成功后，将大鼠俯卧 位固定于手术台上，于颈后正中切开皮肤，逐层分离肌肉暴露左右两侧翼 突孔，用60瓦电烙铁分别烧灼两侧椎动脉使其永久闭塞，缝合切口。假 手术组的大鼠只暴露翼突孔但不闭塞椎动脉。24小时后再次麻醉大鼠， 将大鼠仰卧位固定于手术台上，给大鼠气管插管，吸氧，保留自主呼吸。 于大鼠双侧项部及颞部插入针状电极，用以动态监测脑电波。大鼠四肢插 入电极检测心电图。尾静脉穿刺置管持续泵入乳酸林格氏液体，速度为 lml／h。常温脑缺血再灌注组的大鼠操作至此步骤便可夹闭颈总动脉。浅 低温组大鼠则在其鼻腔插入深度为Icm的细硅胶管并固定，然后将大鼠放 在立体定位仪上固定好，切开头皮暴露骨膜，定好海马区体表标志后，用 微型颅钻钻破颅骨，将温度探头置于其下2mm以测脑温。用静脉泵向大鼠 鼻咽腔输注4C冷生理盐水使其脑温降至33±0．5C，并维持此温度1h。 中文摘要 当大鼠脑温降至33。C后开始夹闭颈总动脉。假手术组大鼠只暴露颈总动 脉但不夹闭。常温组和低温组大鼠夹闭两侧颈总动脉时在其颈前正中部作 一纵行切口，然后逐层分离暴露颈总动脉，用手术丝线穿过颈总动脉并用 动脉夹分别夹闭两侧颈总动脉，夹闭时间为15min。实验过程中根据大鼠 麻醉深度间断给予水合氯醛维持麻醉。 一 。 2．标本采集及检测方法 2．1标本采集 根据大鼠脑缺血后再灌注时间的不同，在规定的时间点将大鼠麻醉断 头，打开颅腔并取出脑组织。大鼠的左半脑放入4％多聚甲醛液中固定。 把大鼠的右半脑先装进标本袋后一并放入液氮罐1分钟，后快速放入一70 ℃冰箱中保存。大鼠的左半脑用于免疫组化检测P-PTEN、Bcl一2、Bax， 大鼠的右半脑用于制作组织匀浆检测iDA、SOD、S100B。 2．2检测方法 2．2．1 MDA、SOD、S100B蛋白的检测 将取出的右半脑组织与0．9％生理盐水制成10％和1％组织均浆。将配 好的组织匀浆用离心机以4000转／分钟低温离心10分钟，取上清液。其 中，1％的组织匀浆提取的上清液用来检测SOD活力，SOD活力的测定采用 黄嘌呤氧化酶法。10％组织匀浆提取的上清液用来检测MDA和S100B蛋白 抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)。上述各指标的检测步骤严格按照相 应试剂盒要求进行。 Bcl-2、Bax、P-PTEN的检测 将固定好的左半脑组织取出，用手术刀片在中线旁开左半脑5mm处矢 状切脑组织，外侧组织弃之。将修整好的组织常规进行脱水、透明、浸蜡、 的检测均采用SP法，具体操作步骤严格按照相应试剂盒要求进行。 结果： 1．各组海马CAl区P．PTEN蛋白表达的比较 中文摘要 组水平(尺0．05)o ． 2各组海马CAl区Bcl-2和Bax蛋白表达的比较 计学意义， 再灌注24小时下降达最低值，之后逐渐升高。Bax随着再灌注时间的延 长表达逐渐增强直至再灌注72小时有所下降。 3各组脑组织中iDA含量和SOD活性的的比较 有统计学意义， 在I／R组中，MDA含量随着再灌注时间的延长逐渐增加，在再灌注24小 时达高峰，之后逐渐下降但仍高于Sham组含量。I／R组的SOD活力随着 再灌注时间的延长逐渐降低，至再灌注24小时活力降低达高峰，之后SOD 活力逐渐增高。