急性髓系白血病FANCG基因表达的探究.pdfVIP

·中文论著摘要· 急性髓系白血病FANCG基因表达的研究 刖 看 急性髓系白血病(AML)是造血干、祖细胞来源的恶性克隆性血液系统疾病， 是成人急性白血病的主要类型，其发病机理尚不十分清楚，特别是复发难治的患 者仍是临床的主要问题，明确AML的发病机制有可能为AML的治疗提供新的靶 点。FA．BRCA通路为我们的研究提供了新的可能途径。 范可尼贫血(FA)是一种罕见的染色体隐性遗传病，除FA．B为X．连锁隐性遗传 外，其余均为常染色体隐性遗传。其临床特征主要表现为进行性的骨髓造血功能 衰竭，伴发多种先天畸形及明显的肿瘤易感性，尤其是AML。目前已经发现了15 core 100)形成FA核心复合物体(FA 的形成是该过程的关键环节，并且此复合体的稳定是决定下游一系列反应正常进 行的基础。研究发现FANCG可与FANCA发生相互作用，这种相互作用是维持组成 FA核心复合体八种蛋白的稳定和进入细胞核所必须的，也是FA核心复合体在核内 聚集的早期事件。在众多的FA患者中，FANCG蛋白缺失患者较其他亚型更易进展 为AML／MDS(骨髓增生异常综合征)，进～步研究发现这些FA患者中存在FANCG 基因突变。已有文献报道FANCG蛋白表达缺失与散发性口腔癌和家族性胰腺癌的 发生存在一定关联。另有研究显示FANCG蛋白在AML细胞株中存在表达缺失。文 献证明FANCG蛋白的调节和活化在FA—BRCA通路中起重要作用。 AML是当今世界尚未攻克的医学难题，对患者的生活质量和生命健康都是严 重的威胁，而现有的治疗手段均不能有效的保证治愈本病，同时在治疗过程中会 Green 对患者造成一定的痛苦和损伤。本研究拟应用SYBR I实时荧光定量PCR技 mRNA的表达状态，通过多样本统计是否存在 术检测AML患者与对照组中FANCG 明显差异，揭示FANCGmRNA表达状态和AML发病及预后的关系，从而为研究 AML的发病机制提供新的思路，为治疗提供新的靶点。 材料与方法 一、研究对象 2011年1月至2011年9月在中国医科大学附属第一医院血液内科门诊及病房 46例(男25例，女21例，中位年龄44岁)、对照组36例(骨髓细胞形态学检 查提示为：继发性贫血、缺铁性贫血及未见特征性血液病改变，男23例，女13 例，中位年龄48．5岁)。病例诊断参照第三版《血液病诊断及疗效标准》。 二、主要试剂与器材 淋巴细胞分离液(普利莱基因技术有限公司)、Trizol(宝生物工程(大连)有限 Kit 公司)、PCR引物合成(宝生物工程(大连)有限公司)、PrimeScfipt@RTreagent PerfectReal Ex Tim“宝生物工程(大连)有限公司)、sysa@Premix1砷TM(宝生物工 Thermal 6000荧光实 程(大连)有限公司)、PCR仪(2720Cycler,ABI)、Rotor-Gene 时定量PCR仪(CorbettResearch公司)。 三、实验方法 (一)密度梯度法提取骨髓液单个核细胞。 (二)应用Trizol按常规方法提取RNA。 (三)cDNA合成，引物设计与合成。 Green (四)SYBRI实时定量PCR及产物分析。 (五)数据处理和统计学分析。 利用相对定量公式2也△Q计算FANCG基因表达水平的差异。结果分析用 SPSSl7．0软件进行，统计描述采用中位数及一X4-SD表示，组间差异若方差齐则 采用独立样本t检验，同时对FANCG基因表达情况与年龄及原始细胞数进行相关 性分析，采用Pearson相关检验。 2 实验结果