溶血磷脂酰胆碱对心肌细胞T型钙离子通道的作用.pdfVIP

中文摘要 溶血磷脂酰胆碱对心肌细胞T型钙离子通道的影响 摘 要 密度脂蛋白(oxidizedlow density 具有广泛的生物学效应。作为～种两性磷脂，在血浆中的正常浓度范围是 12-166洋nol／L。虽然在生理状态下心肌细胞中溶血磷脂酰胆碱的含量较 少，但在心肌缺血状态下，由于磷脂酶A2的激活l¨，可以在心肌细胞胞内 和／或细胞间隙中增加，其作为细胞膜溶解的毒性产物，具有很强的致心 律失常作用。心肌细胞膜上分布有T型和L型钙通道的两种钙离子通道类 型，其中T型钙离子通道在心脏自律性、心血管的重塑和细胞的生长中所 发挥了很大的作用。通过研究溶血磷脂酰胆碱对心肌细胞T型钙通道电流 (Icar)的影响，阐明心肌细胞内和／或细胞间隙中溶血磷脂酰胆碱的增加 引起心律失常的内在信号调控机制。 方法： l制备l。3天薪生Wistar大鼠心室胍细胞。 细胞中稳定表达。 液方法来进行对大鼠心室肌细胞的分离，其基本原理是依靠心脏的搏动来 排出心脏内的积血，避免冠脉血管栓塞或污染，然后再用各种消化酶液进 行其细胞分离。通过两步酶消化方法共得三份不同酶解时间的细胞悬液 孵育箱放置备用。 4使用全细胞膜片钳技术测定新生大鼠心室肌细胞和异源稳定表达 信号机制。 5玻璃微电极的制作和细胞封接与全细胞记录模式的形成。玻璃微电 极经玻璃微电极拉制器两步拉制而成，充以电极内液后微电极入水后阻抗 、 中文摘要 为2～6MQ。应选择纹理清晰、边缘整齐、表面光滑、两端棱角分明的心 室肌细胞进行封接，封接过程利用三维微操纵器移动玻璃微电极，将其移 动至细胞的中间位置，轻压在被选细胞表面，防止细胞出现漂移，略施负 压持续吸引即可形成1GQ水平以上的高阻抗封接，对电极电容补偿后再用 cell 较大脉冲式负压吸破细胞膜，形成全细胞记录形式(whole protoc01) 状态，并通过调节慢电容、快电容补偿和电极串联电阻补偿以减少瞬时充 溶血磷脂酰胆碱处理后最大IcaT值，【C】为溶血磷脂酰胆碱浓度，ECso为溶 血磷脂酰胆碱所致I∞的半效应浓度，h为斜率。 结果： ‘ l溶血磷脂酰胆碱显著提高了新生大鼠心室肌细胞的自律性和Ica．To 至61士7次／分；同时最大Ic钆T增加了20．4％。 3 压钳研究观察溶血磷脂酰胆碱对Ic也T的作用。结果显示PKA抑制剂(H89， 血磷脂酰胆碱对Ic乱水lH的增大作用。然而，PKC抑制剂(白屈菜红碱， 5I_tM)则显著减弱了溶血磷脂酰胆碱对Ic扎T(alH)的作用。这些结果提 示PKC途径的激活可能介导了溶血磷脂酰胆碱引起的ICav3．2升高。用蛋白 pA／pF，n=7：CGP．53353：20．0+2．1pA／pF，n=8)。溶血磷脂酰胆碱在心肌细 中文摘要 胞胞内和胞外的积累可以明显调高Ic削3．2通道电流，但是对Ic鲥3．1通道电流 调控并没有明显作用。蛋白激酶PKCa特异性抑制剂具有阻断溶血磷脂酰 胆碱对Icav3．2的作用。 结论：溶血磷脂酰胆碱通过激活PKCa途径以浓度依赖的方式增强 IcaT，从而增加心室肌细胞的自律性。这可能是在病理条件下触发心律失 常的潜在机制，从而为临床心律失常防治的提供新的思路。 关键词：溶血磷脂酰胆碱；心肌细胞；T钙离子通道；PKCot 英文摘要 —————————————————————————————————————————————————————————————一一一 Influenceof Ca2+channelin T．type ulated