牛磺酸金属衍生物影响大鼠感染创面VEGFA表达的实验探究.pdfVIP

牛磺酸金属衍生物影响大鼠感染创面 VEGFA表达的实验研究 硕士生姓名： 田曦亮 指导教师： 吕德成教授 专业名称： 外科学 摘 要 目的：研究牛磺酸金属衍生物的抗菌活性，及其对大鼠感染创面愈 合过程中VEGFA表达的影响，并初步探讨其与创面愈合之间的关系及 可能的机制。 方法： 1．通过多孔板．MTT比色法测定牛磺酸金属衍生物对金葡菌的最 低抗菌浓度(MIC)： 06 在洁净无菌的96孔板的每孔中加入浓度为lcfu／ml的金葡菌液 0 90“l，药物孔分别加入用DMSO溶解的牛磺酸金属衍生物药液1Ixl， l 0 6．00mg／ml。阴性对照孔加入DMS01pI，每个药物浓度组设4个重复。 培养箱中暗培养24 MTT溶液l h后每孔加入5mg／ml 01．tl显色。将显 色的菌悬液离心，上清液转到另一多孔板中。在全自动酶标仪上以570nm 波长测OD值，记录结果。 按下式计算药物抑制率(％)： 抑制率(％，=堕端礁铲枷。％ 细菌抑制率70％则对该药为高度敏感(S)，测得细菌抑制率70％的最低 浓度即为最低抑菌浓度(MIC)。 2．选择健康雄性SD大鼠72只，体重200220克，随机分为2组， 即实验组(牛磺酸金属衍生物组)和对照组，每组各36只，单笼饲养。 经lO％水合氯醛腹腔内麻醉后，于背部中央剃毛，碘伏消毒。于每只大 鼠背部同一位置用无菌手术刀制作1个直径1．5cm的圆形急性全层皮肤 5 缺损创面。在伤口表面覆盖用lx109．mlo金黄色葡萄球菌lml浸渍的 边长为2cm的方形纱布，包扎伤口，外套钢丝网罩固定。ld后打开伤 口，创口表面附有黄白色脓性分泌物，周围皮温略升高。创面感染模型 造模成功。在实验组每个创面应用最低抑菌浓度的牛磺酸金属衍生物溶 液lml，对照组每个创面应用生理盐水l ml。每隔一天更换一次，直到 创面完全愈合。 3．用药后每天观察两组大鼠的一般情况，包括其活动、进食、创面 有无感染、化脓及肉芽组织生长等大体情况，并于用药后第l，3，7， l0，14和21天，实验组和对照组分别随机选取6只大鼠处死，取两组 大鼠的痂下组织行菌量测定。 4．于用药后第1，3，7，l O，14和21天，根据画膜称重法分别测 量实验组和对照组的创面面积。根据公式：创面愈合率=(原始创面面积 -未愈合创面面积)／原始创面面积×1 00％，计算两组不同时间段的创面愈 合率。 5．以上时间点，切取创面组织，组织形态学(HE染色)观察创面 组织，评价实验组和对照组创面愈合情况。 6．免疫组织化学观察不同时间点实验组和对照组创面血管内皮生长 因子(VEGFA)的表达情况。 7．采用反转录聚合酶链反应(Rt．PCR)技术检测不同时间点实验组 和对照组创面VEGFAmRNA的表达变化情况。 8．统计学处理：实验，数据用X士SD表示，采用SPSS 13．0软件进行 数据分析，采用独立样本f检验比较两组间差异，以尸O．05为有统计学 意义，P0．01为有显著性差异。 结果：1．通过多孔板．MTT比色法测定牛磺酸金属衍生物对金葡菌 的最低抗菌浓度(MIC)为4mg／ml。 2．用药后第1、3和14天实验组和对照