神经母细胞性肿瘤中RASSF1A基因甲基化及其病理类型的相关性研究.pdfVIP

目 录 一、摘要 中文论著摘要……………………………………………………………………．1 英文论著摘要……………………………………………………………………．3 二、英文缩略语………………………………………………………………………．6 三、论文 前言…………………………………………………………………………………………………………7刖吾…………………………………………………………………………………………………………·7 材料和方法………………………………………………………………………．8 结果………………………………………………………………………………………………………．．12 讨论………………………………………………………………………………………………………。13 结j沦………………………………………………………………………………………………………。15 四、本研究创新性的自我评价…………………………．．．．…………………………．17 五、参考文献…………………………………………………………………………18 六、附录 综述………………………………………………………………………………………………………“20 在学期间科研成绩………………………………………………………………．28 致谢………………………………………………………………………………………………………。29 个人简介…………………………………………………………………………30 ·中文论著摘要· 神经母细胞性肿瘤中RASSFlA基因甲基化 与其病理类型的相关性研究 目 的 (neuroblastic tumors，NTS)，是儿童期常见的颅外实体肿瘤，起源于。肾上腺髓质， 腹膜后、纵隔及脊柱旁交感神经节。GNB分为混合型节细胞神经母细胞瘤 (intermixed GNBi和GN归为预后良好型。预后良好型常自行消退或经治疗后，预后较好，而 预后不良型，临床上无论采用何种方法，死亡率仍然没有改变。因此如何改变预 后相关因素对于治疗的指导作用尤为重要。 RASSFlA(Rasassociationdomain protein family1A)基因定位于3p21．3， 是一个约120kb的高频同源缺失区内克隆到的抑癌基因。该基因是继P16基因以 来所发现的在肿瘤中甲基化程度最高、最广泛的基因之一，大量研究表明在多种 肿瘤(如乳腺癌、非小细胞性肺癌、宫颈癌、胃腺癌等)中发现RASSFlA表达 缺失和启动子区高甲基化，故该基因有望在多种肿瘤的早期诊断、预后判断中发 挥重大作用。 PCtL 本实验采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specificMSP)对 NTS进行RASSFlA基因异常甲基化的检测，所有标本均根据国际神经母细胞瘤病 histology,FH)型及预后不良(unfavorablehistology，UH)型，分析两组样本的甲基 化阳性率的高低，明确该基因甲基化是否与病理类型之间存在联系。 ．材料与方法 采用甲基化特异性聚合酶链反应法(methylation．specific 行RASSFlA基因异常甲基化的检测。光学显微镜下切片获得正常肾上腺髓质。 按试剂盒说明书步骤提取NTs组织及肾上腺髓质DNA；对基因组DNA行亚硫酸 氢盐修饰；进行PCR扩增。经SssI甲基转移酶处理和未处理的胎盘组织DNA 分别作为甲基化阳性对照和未甲基化阳性对照，以等量去离子水作空白对照，以 肾上腺髓质DNA作为试验对照。取PCR反应产物，用2％的琼脂糖凝胶电泳，凝 胶成像系统分析仪进行摄像分析。 所有标本均由病理科两位专业技术人员根据国际神经母细胞瘤病理委员会提 出的病理分类标准：即INPC病理分类，分为预后良好(favorablehistology,FH)型 及预后不I曼(unfavorablehistology,UH)型。