神经干细胞移植促进创伤性损伤组织修复和其机制的研究.pdfVIP

·中文论著摘要· 神经干细胞移植促进创伤性脑损伤组织修复及 相关机制的研究 -▲▲．-J一 刖 吾 brain 创伤性脑损伤(traumatic injury,TBI)专指由外伤引起的脑组织损害，又 称颅脑损伤或头部外伤。TBI是世界范围内死亡和致残的主要原因，特别是儿童 和青年人。TBI的全球发病率J下在增加，特别是在发展中国家。严重的TBI会立 即导致神经元和神经胶质细胞受损以及和相关的神经功能障碍，包括认知、情感 和行为障碍，致残率高、死亡率高。20世纪在诊断和治疗领域的重大进展已经 明显降低了死亡率。这种因TBI引起的死亡率的下降导致了残疾人口数量随之增 加，给社会和家庭造成巨大的经济负担和精神负担。对TBI造成的组织损 伤后的修复治疗是当前脑研究的热点。 研究表明，由创伤后的数分钟至数天内发生的一系列复杂的细胞生物化学过 程导致了继发性损伤。这一继发过程可能是治疗失败、并成为在院TBI病人死亡 的最主要原因。目前，尚没有任何药物可以阻止继发性损伤的进展。由于神经保 护性治疗可以限制TBI后的损伤程度，停止或减轻继发性损伤，已经受到了极大 的关注。然而，临床试验中测试的可能阻止这些细胞损伤机制的方法在很大程度 上都失败了。 stem 近年来对于神经干细胞(Neural cells，NPCs)的研究为应用这些细胞治疗脑损伤成为可能，TBI后的功 progenitor 能网络重建已成为干细胞治疗的目的之一。我们前期的研究表明，在选择性的感 觉运动功能试验中，NSCs移植治疗大鼠TBI后第l周，就起到了促进功能恢复的 作用。尽管目I；if体内研究表明移植的NSCs会与受损的内源性神经元发生相互作 用，但其具体作用机制尚不清楚。有研究认为这种对宿主细胞的保护和解救措施 与NSCs释放的某些保护因子或特殊神经介质以及存在于损伤脑组织中的细胞间 信号有关，然而，仅凭这一机制尚不足以阐明NSCs在移植中发挥的有利作用。 因此，本研究应用改良的Feeney法制备TBI动物模型，NSCs脑内移植后， 于不同时间采用免疫组织化学、RT-PCR和免疫印迹等方法检测移植点及其周围 脑组织中细胞连接、细胞粘附和生长相关蛋白的表达改变，探讨移植促进组织修 复的相关机制，旨在为推广临床应用NSCs移植治疗TBI提供可靠的实验依据。 方法 从E14SD大鼠胚胎分离NSCs，进行原代培养及传代培养；用含10％胎牛血 清的培养基对NSCs进行诱导分化；采用免疫细胞化学技术对培养的NSCs和其分 化为神经元的表型进行鉴定。采用改良的Feeney法制备创伤性脑损伤模型。利用 脑立体定位仪和微量注射泵进行NSCs脑内移植。采用免疫组织化学技术、免疫 印迹技术和RT-PCR技术检测在移植后不同时间脑组织损伤区缝隙连接蛋白43 采用非脂质体的脂类转染试剂转染NSCs，应用免疫荧光双标、激光共聚焦扫描显 associated protein43．GAP43)mRNA和蛋白表达的改变。 结 果 血清的培养基对NSCs进行体外诱导分化，发现分化后第2天，多数细胞伸出突 起，以后突起逐渐延长，分支增加。分化后第5d，部分细胞呈[3III．微管蛋白阳性。 2、免疫组织化学显示，无论有无NSCs移植，在移植后第1、2和4w的受损 脑组织中，均可见Cx43在细胞膜上、膜旁的胞浆里及在突起中呈棕黄色表达。 4-0．08 的mRNA和蛋白表达显著高于对照组(P0．01)。 2 3、整合素阳性产物主要表达于细胞膜，呈棕黄色。在对照组及移植组均可见 阳性细胞表达。在不同时间点，NSCs移植组整合素阳性细胞均显著多于对照组， 同一时间点两组间比较，差异有显著性意义(P0．05)。NSCs移植组大鼠移植点及 NSCs移植组移植点及其周围脑组织中整合素的