双水相萃取应用.docxVIP

双水相萃取在蛋白质分离纯化中的应用双水相萃取技术( Aqueous two-phase extraction ,ATPE) 是指亲水性聚合物水溶液在一定条件下形成双水相,由于被分离物在两相中分配的不同,便可实现分离；其双水相体系可由高聚物/高聚物双水相体系、高聚物/无机盐双水相体系、低分子有机物/无机盐双水相体系、表面活性剂双水相体系等组成，被广泛用于生物化学、细胞生物学与生物化工等领域的产品分离与提取。同时，双水相萃取技术作为一种新型的分离技术日益受到重视；此方法可以在室温环境下进行,双水相中的聚合物还可以提高蛋白质的稳定性,收率较高【1】。1、近年来双水相萃取技术研究综述概述由于双水相萃取技术在生物工程、医药分析、金属及一些煤矿等化学分析中具有重要作用,因此也一直是分离提纯领域研究的热点。特别是在近几年，随着生物工程技术、生物化学技术、高分子技术的发展，双水相萃取技术的研究也取得了较快的发展。2008年，郭宪厚【2】对双水相萃取技术进行了综述,阐述了双水相萃取技术的基本原理、特点、工艺流程、物质分配平衡的影响因素及其在生命科学，复杂中药体系的分离以及重金属回收等方面的应用，并对双水相萃取技术的发展前景作了展望。2009年，徐长波、王巍杰【3】对双水相萃取技术进行了综述，并发表了《双水相萃取技术研究进展》，以此综述了双水相萃取技术基本原理、特点、应用及热力学模型,并对双水相萃取技术存在的问题与发展趋势作了论述。2010年，马春宏、朱红【4】等，发表了《双水相萃取技术的应用研究进展》，对双水相萃取技术的具体应用进行了相关综述，简单介绍了双水相萃取技术及其原理、特点, 综述了双水相体系在生物工程( 其中包括萃取分离抗生素、酶、分离提纯蛋白质与萃取其他生物活性物质) 、药物分析与金属分离等方面的应用。2010年，姜大雨、朱红【5】对离子液体双水相萃取的应用研究进行了综述，指出了离子液体双水相的研究取得的一些阶段性的成果，介绍了离子液体双水相体系及其优点, 综述了离子液体双水相体系在生物工业分析、药物分析与金属分离等方面的应用，同时展望了离子液体双水相体系的应用前景。2010年，谭志坚、李芬芳、邢建敏【6】，发表了《双水相萃取技术在分离、纯化中的应用》对对双水相萃取技术的相关具体应用细节进行了较为详细的论述，综述了双水相形成原理、工艺流程与特点、体系类别、影响双水相分配的因素及其在分离纯化中的应用。2011年，刘云【7】对双水相萃取技术的国内研究与工业应用做了相关的综述，也对其进行了系统的概括。2、近年来双水相萃取技术的应用概述近年来，随着双水相萃取技术理论研究的不断深入，其在科研中的实际应用也不断扩展，涉及到了生物工程、蛋白质工程、基因工程等多个领域，以及蛋白质、酶、糖类及其他一些生物化学物质。2009年，徐长波、王巍杰【8】，用双水相萃取技术从钝顶螺旋藻中分离纯化藻蓝蛋白(C-Phycocyanin,C-PC)；采用双水相体系直接从C-PC粗提液中分离纯化C-PC,研究了双水相的类型、成相盐的种类、聚合物的平均分子量与浓度、成相盐的浓度、体系pH以及中性盐的类型与浓度对C-PC分配影响,确定了分离纯化C-PC的双水相类型为聚合物/盐系统。2009年，董树国、赖红伟、陆钊【9】，发表了《双水相萃取在黄酮类化合物分离分析中的应用》，对双水相萃取技术在黄酮类化合物分离分析中的应用进行了具体的论述。2009年，李敏、董慧茹【10】在《双水相萃取-高效液相色谱法测定酵母细胞中麦角固醇含量》中详细介绍了乙醇-水双水相萃取-高效液相色谱法测定酵母细胞中麦角固醇含量的分析方法。2008年，张亚杰，夏杰，陆兵等【11】采用双水相萃取与疏水层析分离纯化重组巴氏毕赤酵母表达的基因工程人溶菌酶。结果表明:当双水相萃取的pH为4,硫酸钠、氯化钠、PEG4000的质量浓度为0.13、0.06与0.08时,人溶菌酶上相回收率达98.8%,纯化因子18.0,浓缩因子3.6。3.双水相萃取技术与传统分离萃取技术相比的优缺点与传统的萃取及其他分离技术相比，双水相萃取对生物物质、天然产物、抗生素等的分离、提取、纯化表现出以下优势：　　(1)整个体系含水量高(70％--90％)，萃取是在接近生理环境的体系中进行，不会引起生物活性物质失活或变性；　　(2)可以直接从含有菌体的发酵液与培养液中提取所需的蛋白质（或者酶），还能不经过破碎直接提取细胞内酶，省略了破碎或过滤等步骤；　　(3)传质速率快，分相时间短。双水相体系中，含水量高，界面张力小，故传质与平衡速率较快；(4)不存在有机溶剂残留问题，高聚物一般是不挥发物质，对人体无害；(5)单级分离提纯效率高。通过选择适当的双水相体系，一般可获得较大的分配系数，也可调节被分离组分在两相中的分配系数，使目标产物有较高收率。(6)