冰淇淋涂抹微生物快速检验方法.docVIP

冰淇淋涂抹微生物快速检验方法摘 要 冰淇淋涂抹微生物检测方法改进。冰淇淋涂抹检测大肠菌群使用一管法试验，既可以节约药品又可以节约初发酵培养时间，同时满足标准判定。 关键词 冰淇淋；涂抹；检测 中图分类号：R319 文献标识码：A 文章编号：1671—7597（2013）022-083-1 冰淇淋生产企业控制微生物，需要验证生产线的机械设备（模具、灌料小车、料管内壁等）、工艺器具（料筐、工艺桶等）、操作人员（人手、手套、套袖等）、辅料、内表面（如桶预制杯内壁，包装膜内壁）的涂抹微生物的情况，来判断微生物的污染程度和清洗消毒效果，检测大肠菌群和菌落总数，使用传统的国标方法，操作繁琐，检验时间长。 该项冰淇淋涂抹微生物快速检验方法，大肠菌群使用一管法试验，既可以节约药品又可以节约初发酵培养时间，同时满足标准判定。 1 材料与方法 1.1 材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 无菌试管：直径18 mm*180 mm。 无菌生理盐水：称取8.5g氯化钠溶于1000 mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15 min。 涂抹棒（棉棒）：经121℃高压灭菌20 min。 1.2 药品 1.2.1 平板计数琼脂（plate count agar，PCA）培养基 成分： 胰蛋白胨5.0 g；酵母浸膏2.5 g；葡萄糖1.0 g；琼脂15.0 g；蒸馏水1000 mL；pH7.0±0.2。 制法： 将上述成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH。分装试管或锥形瓶，121℃高压灭菌15 min。 1.2.2 无菌生理盐水 成分： 氯化钠8.5 g；蒸馏水1000 mL。 制法： 称取8.5 g氯化钠溶于1000 mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15 min。 1.2.3 双料乳糖胆盐发酵培养基 成分： 蛋白胨20 g；猪胆盐（或牛、羊胆盐）59；乳糖10 g；0.04%溴甲酚紫水溶液25 ml；蒸馏 水加至1000 ml。 制法： 将蛋白胨、胆盐及乳糖溶于水中，校正pH至7.4，加人指示剂，分装每管50 ml，并放人一个小倒管，115℃灭菌15 min，即得。 1.2.4 煌绿乳糖胆盐（Brilliant Green Lactose Bile，BGLB）肉汤 成分： 蛋白胨10.0 g；乳糖10.0 g；牛胆粉溶液200 mL；0.1%煌绿水溶液13.3 mL；蒸馏水800 mL；pH 7.2±0.1。 制法： 将蛋白胨、乳糖溶于约500 mL蒸馏水中，加入牛胆粉溶液200 mL（将20.0 g脱水牛胆粉溶于200 mL蒸馏水中，调节pH至7.0～7.5），用蒸馏水稀释到975 mL，调节pH，再加入0.1%煌绿水溶液13.3 mL，用蒸馏水补足到1000 mL，用棉花过滤后，分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10 mL。121℃高压灭菌15 min。 1.3 涂抹操作步骤 1）进入冰淇淋车间后，先经过地面消毒池消毒。 2）在洗手池中用清水洗手后消毒，避免在涂抹过程中污染样品。 3）涂抹前用75%的酒精棉球对手、剪刀和镊子消毒。 4）用消毒镊子取湿润灭菌涂沫棒，用手拿涂抹棒棒柄，涂于被涂抹物表面，剪去手接触部分棉棒，放入装有10 mL灭菌生理盐水的带有倒立小导管的试管，盖好试管，使之充分混合。 2 结果与讨论 2.1 菌落总数的测定及报告 菌落总数的检测执行原液，即使用原液依据GB4789.2《食品安全国家标准食品微生物学检验 菌落总数测定》检测，同时，分别吸取1 mL无菌生理盐水加入两个无菌平皿内作空白对照。结果报告时，以平均菌落数乘以最低稀释倍数报告，未长菌以小于1乘以最低稀释倍数报告。 2.2 大肠菌群的测定及报告 吸取8 ml的双料乳糖胆盐发酵培养基加到剩余的8 ml（上述检测完菌落总数后剩余的样液）样液中，然后置于36±1℃培养箱中培养24±2h；如乳糖胆盐发酵培养基产酸不产气，则报告为大肠菌群阴性，报告≤0.03 MPN/cm2，如有产气者，进行复发酵试验。 用接种环从产气的乳糖胆盐发酵培养基中分别取培养物1环，移种于煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）管中，置36±1℃，培养48±2h，然后观察BGLB是否产气，如不产气则报告为大肠菌群阴性，如有产气者则报告为大肠菌群阳性，报告0.03 MPN/cm2。 3 结论 综上所述，该方法是一种快速检测方法，通过对大肠菌群的检测方法进行改进，培养时间比国标节约24 h-48 h，可以满足大肠菌群检测的要求，且具有快速、简便、准确的优