联合应用WT1-siRNA及人参皂甙Rg3对恶性黑素瘤细胞WM451耐药性的逆转.pdfVIP

联合应用WT 1一siRNA和人参皂甙R93对恶性黑素瘤细 胞WM451耐药-I生的逆转 硕士生姓名： 马慧芳 指导教师： 高明阳 教授 指导小组： 高明阳 教授 专业名称： 皮肤病与性病学 摘 要 R93)在逆转体外培养恶性黑素瘤细胞WM451对化疗药物顺铂(DDP)、氮 烯咪胺(DTIC)耐药的作用。 方法：构建针对WTl基因的siRNA真核表达载体，利用脂质体转 l 1细胞，以G4 染WM45 8筛选，获得稳定转染细胞株，分别以逆转录聚 方法检测转染细胞中WTlmRNA及蛋白表达水平的改变，MTT法检测 l细胞增殖的影响及对细胞耐药的 WTI．siRNA、人参皂甙R93对WM45 细胞凋亡的影响。 结果：成功构建靶向人WTl基因的siRNA真核表达载体，获得稳 定转染细胞株，转染细胞WTl 干扰组细胞的凋亡率(5l％)较对照组明显增加(9％)，干扰组细胞生长受抑 制：人参皂甙R93对黑素瘤细胞生长同样有抑制作用且与浓度呈正相关， 显示WTl．siRNA分别逆转细胞对顺铂、氮烯咪胺的耐药性2．1、1．5倍， 倍，联合应用WTI．siRNA和人参皂甙R93分别逆转细胞对顺铂、氮烯 咪胺的耐药性3．8l、3．42倍。 结论： 1．脂质体转染siRNA可特异性下调WTImRNA及蛋白水平。 2．下调WM45l细胞WTI基因表达可促进细胞凋亡，抑制细胞增殖。 3．人参皂甙R93可以诱导细胞凋亡，抑制细胞增殖，其抑制作用与 浓度呈正相关。 4．单独、联合应用WTI．siRNA和人参皂甙R93均可增加顺铂、氮烯 l细胞对化疗药物的耐药性， 咪胺对WM451细胞的抑制作用，逆转WM45 且以联合的作用最强，为临床中西医联合治疗提供了实验依据。 RNAi 耐药性 恶性黑素瘤 关键词：WTl基因 人参皂甙R93 2 吖哪 “蚶趴mⅥk t O S d Jdm -通 aR∽ Ⅲ№ N硷 Ⅲm以吼m 脓帆n ．¨g m出瞅eh T思柏 翟一 Master candidate：Ma degree Huifang Gao Supervisor：Professor Mingyang Major：dermatology Abstract Objective：To thereversal investigate effectof WTI．siRNA combined