耐碳青霉烯类药物鲍曼不动杆菌耐药机制探究.pdfVIP

目 录 耐碳青霉烯类药物鲍曼不动杆菌耐药机制研究 错误!未定义书签。 前 言 7 第一部分 碳青霉烯类药物耐药鲍曼不动杆菌耐药基因的研究 10 材料与方法 10 1 材料 10 2 方法 11 结 果 13 1 药敏实验结果 13 2 基因检测结果 15 讨 论 19 第二部分 碳青霉烯类药物耐药鲍曼不动杆菌蛋白组学研究 22 材料与方法 22 1 材料 22 2 实验方法 22 3 质量控制 25 结 果 25 1鲍曼不动杆菌蛋白质指纹图谱 25 2 聚类分析结果 27 讨 论 29 结 论 31 参考文献： 32 致 谢 35 蛋白组学技术在临床微生物检测和研究中的应用(综述) 37 耐碳青霉烯类药物鲍曼不动杆菌耐药机制研究 摘 要 目的 本研究拟通过对本院临床分离的 40 株鲍曼不动杆菌耐药谱进行分 析，筛选出对碳青霉烯类抗菌药物耐药 的菌株，用聚合酶链反应 （Polymerase Chain Reaction, PCR ）技术检测碳青霉烯酶耐药基因，旨在 阐明鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药的主要机制，对指导临床合 理使用抗菌药物，预防和控制碳青霉烯类耐药菌株的流行提供科学依据。 同时采用差异蛋白组学的方法，利用 SELDI-TOF-MS 技术检测碳青霉烯类 抗菌药物耐药和敏感菌株蛋白指纹图谱，结合聚类分析探索其用于查找碳 青霉烯类抗菌药物耐药菌株亲缘性远近的临床价值。方法 1. 收集本院 2011 年 1 月~2012 年 12 月临床分离的鲍曼不动杆菌株。2.使用 MicroScan WalkAway96 全自动微生物鉴定/药敏测试系统鉴定，并通过仪器检测其对 妥布霉素、复方新诺明、哌拉西林、氨苄西林-舒巴坦、哌拉西林/他唑巴 坦、头孢曲松、阿米卡星、头孢他啶、环丙沙星、头孢噻肟、头孢吡肟、 庆大霉素、加替沙星、亚胺培南、左氧氟沙星等的最低抑菌浓度（MIC ）， 分析其耐药情况，筛选出对碳青霉烯类抗菌药物耐药的鲍曼不动杆菌。3. 用聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction, PCR ）技术检测碳青霉烯类相 关耐药基因 IMP、VIM 、OXA-23 、OXA-24 、OXA-58，然后对 PCR 扩 增阳性产物电泳并成像，对 PCR 扩增阳性的产物进行测序，把测序结果与 GenBank 数据库进行比对。4.对所有 40 株鲍曼不动杆菌菌株先破坏细菌提 取蛋白质，再用 SELDI-TOF-MS 技术及 Au 蛋白芯片检测细菌蛋白质指纹 图谱。5. 用 Biomarker Wizard 3.1 软件进行分析获得的细菌蛋白质图谱， 筛选出碳青霉烯类抗菌耐药和敏感鲍曼不动杆菌菌株相关差异表达蛋白， 用 SPSS 19.0 对碳青霉烯类抗菌耐药鲍曼不动杆菌进行聚类分析，追溯其 临床感染的亲缘性。结果 1.分离本院临床标本共获得 40 株鲍曼不动杆菌。 2.对 40 株临床分离的鲍曼不动杆菌的耐药谱进行分析，获得对碳青霉烯类 1 药物耐药鲍曼不动杆菌 22 株，耐药率为 55%，这 22 株碳青霉烯类药物耐 药鲍曼不动杆菌对临床常用抗菌药物耐药率为 100%。3.在 22 株碳青霉烯 类药物耐药鲍曼不动杆菌耐药基因中，OXA-23 阳性有 16 株，阳性率为 72.7%， OXA-58 阳性有 5 株，阳性率为 22.7%， VIM 阳性有 7 株，阳性 率为 31.8%，1 株同时携带 OXA-23 、OXA-58 和 VIM 基因，阳性率为 4.5% ， 3 株同时携带 OXA-23 和 OXA-58 基因，阳性率为 13.6%，7 株同时携带 OXA-23 和 VIM 基因，阳性率为 31.8%；未检测到基因 OXA-24 和 IMP 。 OXA-23 、OXA-58、VIM 基因扩增阳性产物测序结果经 BLAST 程序对比 分析与 NCBI 的相应基因序列的