体外激活的小胶质细胞对神经元细胞的作用探究.pdfVIP

摘要 目的 1．建立和完善大鼠脑皮质小胶质细胞原代培养的实验方法和条件；2．探 索原代培养的小胶质细胞经脂多糖(LPS)体外激活后对神经元细胞的影响；3．通 过丁基苯酞(NBP)对小胶质细胞激活过程的影响，探讨国家I类新药NBP可能的 新的作用靶点。 方法原代培养大鼠脑皮质小胶质细胞和神经元细胞；利用LPS刺激小胶质细 胞，建立原代培养的小胶质细胞体外激活的细胞模型；提取LPS激活的小胶质细胞 的培养基上清液作用于神经元细胞，通过四甲基偶氮唑盐(M兀)检测神经元细胞 的存活率；在加入LPS作用前用NBP处理小胶质细胞，通过观察小胶质细胞的形态， ELISA法定量检测炎性因子IL一1B、TNF—Q及IL一10的释放，硝酸还原法检测炎性 介质一氧化氮(NO)，以及MTT检测神经元细胞经其培养基上清液作用后的存活率， 综合评估NBP对小胶质细胞激活的影响。 结果成功培养出数量多、纯度高的大鼠脑皮质小胶质细胞；LPS激活的小胶 质细胞的培养基上清液可致神经元细胞的存活率下降；NBP处理后的小胶质细胞经 9、TNF_a及IL一10的含 LPS作用后，仍呈现为激活形态，其释放的N0减少，IL—l 量无明显变化，经其培养基上清液作用后的神经元细胞存活率较对照组升高，且丁 基苯酞的上述作用呈现一定的剂量依赖性。 结论激活的小胶质细胞对神经元细胞起毒性作用；NBP不能抑制小胶质细胞 的激活，但能通过抑制激活的小胶质细胞生成NO，从而减轻激活的小胶质细胞对神 经元细胞的毒性作用，并具有剂量依赖性。 关键词小胶质细胞；激活；神经元；丁基苯酞 2 Abstract 1．T0esk山hshandcoIlsull：1Ir娥e conditi0璐 Object量ve exper面emal眺ds锄d rat in thee丘．eCt iSohted丘omC0rticesvitr0．2．T0 向p呦culturcdlIlicroglia e冲10re culnlred aCtiVated muroniIl诚r0．3． ofpriIIlaryIIlicr091ia by1枷polysaccharide(LPS)on the e位ctof Accord啦t0 d1-3-n．butylphthalide(NBP)onlIlicroglial t0 the ofNBPwllichservcd舔Iclassofnatioml e冲ohpossiblenew魄ets du玛s． Methods cellsaIldneur0璐wereisohted丘Dmratcorticesfor Microglia pri珊Ir)r cultured cellswercstirImlatedwithLPSt0conscn衄the culture．PrimaDr111icroglia a甜Vated ceU啪delillVi!tr0．Neuron-richcuhureswerestiIIlulatedm IIlicrogHa of activated thentl硷sⅧ～ivalrateofneuro璐w嬲 吼lpemat趾t LPS，锄d IIlicr091ia by evaluated