同种异体骨髓间充质干细胞治疗兔桡骨骨折不愈合的实验探究.pdfVIP

中文摘要 同种异体骨髓间充质千细胞治疗兔桡骨骨折 不愈合的实验研究 摘 要 ● ● 尽管骨科近年来发展迅速，但骨折不愈合仍是临床中面临的一个重要 问题，在正常的骨折愈合过程中，未分化的骨髓间充质干细胞在骨形态蛋 白(BMPs)和调节因子的影响下增值，分化成软骨细胞和骨细胞，最终形 成骨，达到修复损伤。然而一部分骨折没有由于没有完成修复过程，最终 导致延迟愈合或者不愈合，增加手术次数，延长住院时间。骨折不愈合的 诊断是建立在一系列临床症状和物理检查上的，它包括疼痛，骨折端的活 动以及放射学检查。骨折治疗6．8个月后仍没有愈合考虑骨折不愈合，不 同部位的发病率约5％．20％。 近年来随着干细胞培养、分离等技术的发展使骨折不愈合的治疗有了 stemcells， 更多的选择。从骨髓提取分离、纯化间充质干细胞(mesenehymal MSCs)能,演变为多种组织细胞，在多种因素的刺激下可分化为几乎各种中 胚层细胞，如骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞等，可作为各种组织修复的选 择。本实验即以同种异体兔骨髓间充质干细胞修复兔骨折不愈合模型，观 察其修复兔桡骨骨折不愈合模型的效果，从而探讨同种异体MSCs的体内 修复骨折不愈合的机制，为进一步使用同种异体MSCs治疗骨折不愈合提 供实验支持。 目的： 研究兔骨髓间充质干细胞的体外分离、培养、纯化方法，以及观察免 骨髓间充质干细胞生长情况。用兔桡骨制作骨折不愈合的模型。通过骨髓 间充质干细胞的培养扩增，治疗兔桡骨骨折不愈合模型，研究骨髓间充质 干细胞移植治疗骨折不愈合的效果及机制，以及不同数量的细胞移植对骨 折不愈合的影响。从而进一步为人自体、异体骨髓间充干细胞的体外培养 应用治疗骨折不愈合提供依据。 一 方法： l用Brownlow法制做新西兰大白兔桡骨骨折不愈合模型，将其一侧 桡骨干中远1／3截断，去除5mm骨质及骨膜，用骨蜡封闭骨折端，使骨 折保持5ram的间隙。术后8周，使其形成兔桡骨萎缩性骨折不愈合的模 中文摘要 型。 2采用贴壁筛选法从兔股骨近端髓腔骨髓组织中分离、纯化BMSCs，进 行体外培养扩增，应用免疫组化染色方法对细胞表型、纯度进行鉴定。 3将培养的细胞低温保存，待骨折不愈合模型完成后，复苏MSCs，扩增 X106／ml 培养，消化培养瓶中的细胞，PBS洗涤后，计数，制成细胞浓度为1 的细胞悬液，将骨折不愈合模型随机分为3组， A组给予不愈合部位 0．2ml细胞悬液注射。B组给予不愈合部位0．4ml细胞悬液注射。C组不 愈合部位仅打通髓腔。分别在给予MSCs移植治疗4周和8周行X线检 查，观察骨折愈合情况。 结果： 1骨折不愈合模型制作术后8周，影像学和组织学检查，其形成类似于临 床萎缩性骨折不愈合的模型。 2培养的兔骨髓间充质干细胞贴壁生长，细胞多为为短梭形或纺锤形，典 型的为漩涡状排列，比较均一；采用免疫细胞化学检查发现培养的细胞表 达细胞表面抗原CD44，不表达CD34，证实所培养的细胞为兔BMSCs。 3 BMSCs移植治疗骨折不愈合术后8周行X线检查和组织学显示：A 组中7只兔桡骨骨折愈合，3只未愈合；B组中9只兔桡骨骨折愈合，1 只未愈合；C组中有2只兔桡骨骨折愈合，8只未愈合。干细胞治疗组较 对照组骨折愈合率高，p0．05，差异具有显著性。 结论： 1通过贴壁筛选法可分离、纯化骨髓间充质干细胞，经过体外培养扩增可 获得成分较均一的BMSCs。该方法简便有效，分离、纯化效果较理想， 为细胞移植治疗提供良好的来源。 2同种异体骨髓间充质干细胞可以成功治疗兔桡骨骨折不愈合的模型，并 且随着移植细胞数量的增加骨折愈合率增加。 关键词：骨髓间充质干细胞；细胞培养；骨折不愈合