丁酸梭菌体外粘附抗菌特性和对鮸鱼肠道生理地影响.pdfVIP

引言 动物肠道是消化吸收的主要器官，是机体汲取营养物质的入口，同时也是 病原入侵的主要通路。肠道内含有大量的固有菌，起到生物屏障的作用，阻断 有害物质损害肠黏膜，而过路菌或临时菌，因环境的改变只短暂停留。肠道内 菌落生态的改善、优化能够起到促生长，抗疾病等对机体有益的效果。益生菌 便是一类活的微生物制剂，能够在肠道内抑制病原菌增殖，改善肠道环境，保 持机体健康生长。益生茵的有效使用，能够代替抗生素，从而避免抗生素使用 带来的耐药、残留等负面影响。 当前，益生菌效果不一，在很大程度大是由于益生菌缺乏在肠道内定植的 能力，很难持久的发挥益生功效，因此选用益生菌菌株时，其是否能够粘附于 肠道是一个重要参考指标。益生菌的粘附可采用体外和体内研究方法，但由于 体内研究存在鉴定难、分离难等因素，更多的采用体外粘附研究。以培养肠道 上皮细胞为研究模型，模拟机体肠道内环境，研究益生菌是否能附着细胞表 面，是否会损伤细胞等一系列变化。抗菌作用是益生菌的一大特点，其能致死 或阻止有害菌定植于肠道。以细胞为研究模型，可以评价益生菌对某病原菌粘 附肠道的阻断效果，并研究细菌互作机理，探讨粘附机制。 丁酸梭菌(Clostridiumbutyricum)，即酪酸菌，常作为益生菌用来防治由 于多种因素引起的人和动物的腹泻、肠炎等疾病。该菌主要存在于土壤、人和 动物肠道内，革兰氏阳性，厌养产芽孢，通常被认为是安全的益生菌。已有的 实验表明，丁酸梭菌能够很好的改善陆生动物肠道内生态环境，抑制病原菌增 殖，增加免疫，提高消化能力等功效。本次研究，尝试培养鱼肠道上皮细胞， 并作为粘附研究模型；评价丁酸梭菌在肠道上皮细胞上的粘附能力，及安全 性；研究丁酸梭菌对致病菌鳗弧菌粘附的阻断能力；通过饲喂，研究丁酸梭菌 对娩鱼生长、肠道生理的影响，并探讨丁酸梭菌的作用机理。 第一章研究综述 第一节抗生素在水产养殖中的应用及面临的挑战 随着水产养殖的不断发展时，抗生素在水产饲料及水产养殖中的应用也越 来越广泛。抗生素的应用极为有效地控制了许多疾病的发生，无疑为水产养殖 业的发展做出了巨大的贡献。但是，抗生素的使用是一把“双韧剑”，也给人 类和养殖业带来了许多副作用，并且日益严重。抗生素是细菌、防线菌、真菌 等微生物的代谢产物，或是用化学半合成法制造的相同或相类似物质。抗生素 在低浓度下对特异的微生物(包括细菌、真菌、立克次体、病毒、支原体和衣原 体)的生长有抑制或杀灭作用。由于抗生素的长期大量使用，也培育了大批耐药 菌株，甚至出现超强菌株，出现水产品药物残留，微生态失衡等等问题，威胁 人类健康。 1鱼类病原菌 由鱼类病原菌引起的疾病为的细菌性疾病，其严重危害鱼类健康，常造成 水产养殖业的严重损失，该类疾病的研究一直受到国内外研究工作者的关注。 年正式发表的对疖疮病的研究，其后，随着微生物学研究技术的发展和鱼类高 密度养殖的兴起，促进了世界各国对鱼类细菌性疾病的研究，迄今己分离报道 的鱼类主要致病菌已达数十种，其中包括～些条件致病菌，尽管对鱼类的原初 et a1．，1987)。我国对鱼类细菌 致病菌和条件致病菌的明确划分尚有争论(Austin 病的研究起步于王德铭先生1956年对荧光假单孢菌引起青鱼赤皮病的研究，随 后我国鱼病工作者先后对点状产气单孢菌、腐败假单孢菌(Pseudomonas 爱德华氏菌、弧菌I组中淡水亚组弧菌、鲁氏耶尔森菌、河弧菌生物型Ⅲ、大肠 埃希氏菌等引起的肠炎病、腐皮病、烂鳃病、疖疮病、打印病、爱德华氏病、 烂尾病、弧菌病以及淡水养殖鱼类爆发性传染病等进行了病原菌分离、鉴定、 药物筛选以及疫苗的研究(徐伯亥，1986；韩先朴等，1989；徐伯亥，1991a； 6 第一章研究综述第一节抗生紊在水产养殖中的应用及面临的挑战 1991b)。在此基础上，进一步开展了对草鱼烂鳃病、异育银鲫溶血性腹水病、虹 鳟鱼肠道感染症和淡水养殖鱼类暴发性传染病的组织病理学、病理生理学以及 了草鱼烂鳃病酶免疫测定法检测、疫苗和抗菌药物的毒理研究。自8O年代后期 国内有关学者已开始注意到鱼类致病菌的致病