可诱导性共刺激分子（ICOS）单抗对T细胞诱导地胰岛细胞凋亡和胰岛功能影响地研究.pdfVIP

研究背景 糖尿病严重成胁人类的健康，已成为当前继心血管疾病、肿瘤之 后的全球第三大非传染性疾病。而根治糖尿病的措施最好是在体内建 立内源性的胰岛素分泌系统，其中，胰岛移植无疑是较理想的方法。 2000年Edmonton方案的成功为胰岛移植的发展翻j开了新的一页，然 而，胰岛移植要广泛开展，最大的难题仍然是移植免疫排斥反应及移 植物的凋亡，而诱导移植供体特异性的免疫耐受，降低移植物的凋亡， 提高胰岛的生物学性能，则是解决这一难题最理想的方案。 所谓免疫耐受，就是在一定条件下，机体免疫系统接触某种抗原 后所产生的对该抗原的特异性低应答或无应答状态。免疫耐受可分为 天然免疫耐受和获得免疫耐受。免疫耐受具有特异性，机体仅对诱发 免疫耐受的抗原无应答，而对其他无关抗原仍保留正常的免疫反应 性。目前，诱导免疫耐受的方法很多，如胸腺内注射抗原，阻断T细 胞的共刺激或共激活途径，诱导混合嵌合状态，抗原递呈细胞(APC) 的修饰等，其中，阻断T细胞的共刺激途径这种方法日益受到重视。 54， 而T细胞表面的共刺激分子众多，如ICOS／B7RPl，CD40／CDl 点。 可诱导性共刺激分子(ICOS)和CD28及细胞毒性T淋巴细胞 是由二硫键连接的二聚体，其相对分子量为55～60KD，成熟的ICOS 是1型跨膜糖蛋白，含有一个单一的免疫球蛋白(Ig)样区，一个23 个氨基酸跨膜区和一个35个氨基酸的胞浆尾区。ICOS的表达同时受 到T细胞受体(TCR)和CD28信号的影响。单独用佛波一12一肉豆蔻 酸酯13乙酸酯(PMA)和离子霉素刺激CD4+T细胞只能观察到很 南糸怡、引k々’坝I。于’位论殳 少的ICOS表达，而联合二者则能引起ICOS的持续表达。CD28共 刺激能增强ICOS的表达，而在缺B7．1／B7．2时ICOS的上调表达显 著减少，提示很可能以前某些被认为是CD28的功能实际上与1COS 有关。 目前认为，在T细胞活化的不同时空阶段，多种共刺激分子发挥 着各自不同的调控作用。CD28这一经典共刺激分子主要在T细胞应答 的启动和早期起作用，而ICOS这一新近发现的共刺激分子主要作用 在T细胞应答的晚期以及活化后T细胞效应的维持阶段。一般认为， ICOS共刺激途径的生理功能主要表现在以下几个方面：(1)为辅助 性T细胞(Th cell)的有效增殖和活化提供共刺激信号，在活化后Th 细胞的效应功能的维持上发挥重要作用。(2)调节Thl、Th2应答， 增强多种细胞因子的诱导产生。(3)促进T、B细胞协同，影响抗体 类型转换，与其它共刺激途径相互作用。(4)参与CD8+T细胞应答， 并且在再次毒性T细胞(CTL)应答中发挥显著作用。 近年来，随着对ICOS研究的不断深入，运用ICOS单抗或ICOS融 合蛋白阻断ICOS共刺激途径来延长器官移植物的存活，降低移植物 的凋亡率，避免急慢性排斥反应的实验研究日益增多，而且，大量的 试验数据已表明，ICOS单抗在心脏移植、肝移植动物模型中可明显 延长移植物的存活时间，而对于ICOS单抗在胰岛移植应用的研究尚 刚刚起步。本课题主要在细胞水平研究ICOS单抗的作用，将ICOS单 抗与T细胞及胰岛细胞共育后，观察ICOS单抗对RINm5f细胞凋亡的 保护作用及对胰岛素基因及胰岛细胞生长和成熟相关转录因子基因 表达的影响，进一步探讨1COS单抗减少移植物凋亡的可能机制，为 ICOS单抗在胰岛移植免疫耐受中的合理应用提供实验依据。 第一部分ICOS单抗对T细胞诱导的胰岛细胞凋亡及凋亡相关 基因表达影响的研究 第一节ICOS单抗对T细胞诱导的胰岛细胞凋亡的影响 摘要 目的：探讨ICOS单抗对T细胞诱导的胰岛细胞凋亡的保护作用。 时，流式细胞仪检测RINm5f细胞的凋亡率。 结果：与T细胞共育12、24、48小时后，胰岛细胞的凋亡率均明显 升高(po．05)，且呈时间依赖性。加入ICOS单抗后，胰岛细胞的凋 亡率显著下降(PO．05)。 结论：T细胞可诱导RINm5f细胞的凋亡，而ICOS单抗对胰岛细胞 的凋亡具有保护作用。 关键词：可诱导性共刺激分子