免疫细胞的分离和检测-安徽理工大学.pdfVIP

安徽理工大学医学院 S c h o o l o f M e d i c i n e 教案首页 次课 授课时间 年 月 日 教案完成时间： 年 月 日 临床免疫学和 课程名称 年 级 专业、层次 免疫检验 专业技术 授课方式 教 师 张荣波 学时 3 职 务 （大、小） 授课题目 （章、节） 第十三章 免疫细胞分离及检测技术 基本教材或主要参考书 王兰兰主编 《临床免疫学和免疫检验》 （ 3 版，人民卫生出版社） 教学目的和要求： 1. 掌握免疫细胞分离及检测的原理及方法 2. 掌握淋巴细胞表面标志的检测及亚群分类 3. 掌握淋巴细胞功能检测技术 4. 了 免疫细胞检测的临床意义 大体内容与时间安排，教学方法：课堂讲授 辅以启发式提问，配以多媒体投影 1、免疫细胞分离及检测（1.0 学时） 2 、淋巴细胞表面标志的检测（1.0 学时） 3、淋巴细胞功能检测（0.9 学时） 4 、免疫细胞检测的临床意义 （0.1 学时） 教学重点、难点： 重点：免疫细胞分离及检测的原理 难点：密度梯度离心法的原理 教研室审阅意见： （教研室主任签名） 年 月 日 （教案续页） 辅助手段和时间 基 本 内 容 分 配 备 注 用体外方法对机体具有免疫反应的外周血淋巴细胞及其亚群的数目或 比例以及它们所显示的功能进行检测，是判断机体细胞免疫水平的一种重 要手段。这对于临床认识疾病、探讨其发病机制、观察病情变化、判断预 后、考核疗效和防治疾病等方面均具有重要意义。 1.0 学时 第一节 免疫细胞的分离 进行有关细胞免疫方面的检测，特别是有关免疫细胞功能的体外实验， 往往须将待检淋巴细胞从血液或组织中分离出来，而外周血会有多种细胞 成分，包括淋巴细胞、单核细胞、粒细胞、红细胞和血咆群体。但淋巴细 胞的物理特性及生化特性与其他细胞差异甚微，用简单的方法不容易分纯， 也是由于这一原因产生了专门的淋巴细胞分离纯化技术。 一、外周血单个核细胞分离 外周血单个核细胞(peripheral mononuclear cells，PMNC)包括淋巴 细胞和单核细胞(monocyte)。单个核细胞的体积、形态和比重与外周血其 他细胞不同，红细胞和多核白细胞的比重在 1.092 左右，单个核细胞的比 重为1.075-1.090，血小板为1.030-1.035。因此利用一种介于1.075-1.092 之间而近于等渗的溶液作密度梯度离心，使一定密度的细胞按相应密度梯 度分布，可将各种血细胞与单个核细胞分离。 分离溶液是分离各类细胞的关键，对分离溶液的基本要求是：①对细 胞无毒；②基本等渗；③不同于血浆等分离物质；④有一定的比重。聚蔗 糖-泛影葡胺是一种较理想的细胞分层液，商品名为Fic