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核黄素微生物发酵工艺 动医104班国梦婕 摘要：本文简介了核黄素的理化特性，概述了其在动物生长、饲料、疾病防治等方面的作用，重点介绍了微生物发酵产核黄素生产工艺的特点，工艺过程，设备，质量检测等内容，并展望了其发展。 关键词：核黄素；生产工艺；微生物；发酵 核黄素又称维生素B2（VB2）B族维生素，1920 年被第一次发现，1931 年第一次从卵蛋白中分离出来，1935 年核黄素的化学结构被鉴定[1]。其辅酶形式是黄素单核苷酸和黄素腺嘌呤二核苷酸。核黄素是自然界中存在广泛的一种氨基酸，是哺乳动物必需的一种营养物质。与其它的B族维生素相同，核黄素在动物体内的储存是有限的，因此，需要每日由饮食提供。 1核黄素的分子结构及理化特性 1.1核黄素的分子结构 核黄素的分子式是C17H20O6N4，分子量为376.36。系统命名为7,8-二甲基-10-（1-D-核糖基）-异咯嗪。 1.2核黄素的理化特性 核黄素是一种黄色到橙黄色细针状晶体，微臭，微苦，是一个核糖醇侧链的异咯嗪的衍生物。其在常温下稳定，在278~282 ℃熔融并且分解（约在240 ℃时变色），并且不受氧气影响。核黄素微溶于水，在27.5 ℃下，溶解度为12 mg/100mL，核黄素水溶液呈黄色并有绿色荧光。其稍溶于乙醇、环已醇、苯甲醇、乙酸，不溶于乙醚、氯仿、丙酮和苯，可溶于氯化钠溶液，易溶于稀的氢氧化钠溶液，在碱性溶液中容易溶解，在强酸溶液中稳定。耐热、耐氧化。光照及紫外照射引起不可逆的分解。 2核黄素的生物作用 核黄素是机体必需微量营养素之一，具有广泛的生理机能，被世界卫生组织（WHO）列为评价人体生长发育和营养状况的六大指标之一。在生物体内，核黄素以黄素单核苷酸和黄素腺嘌呤二核苷酸的形式存在，直接参与碳水化合物、蛋白质、脂肪的生物氧化作用，在生物体内具有多种生理功能。因而核黄素在食品、饲料、医药工业等方面具有广泛的应用前景[2-4]。 如果机体缺乏核黄素就会影响生物体正常的氧化作用, 引起物质代谢紊乱, 出现一系列的病症, 严重的将会导致死亡。如鸡的核黄素缺乏，就会导致其消化机能衰退，眼与皮肤抗抵力下降，从而使小鸡易患曲爪病，种鸡则会影响种蛋的孵化率。猪的核黄素缺乏，就会导致其生长迟缓，四肢僵硬，皮肤破裂，慢性腹泻，眼睛发炎等。因此，对于集约化养殖来说，核黄素是一种不可缺少的饲料营养成分。在饲料中适当添加核黄素，不仅能够满足畜禽生长和生产的需要，还能在一定程度上降低疾病的发病率。 3核黄素生产工艺 核黄素较早就实现了商业化生产。目前，国际生产核黄素的工艺方法主要有4种：植物抽提法、化学合成法、微生物发酵法以及半微生物发酵半化学合成法[4]。其中，微生物发酵法是近年来发展起来的一种经济有效的方法，其生产核黄素具有设备简单、对环境无污染、成本低、生产周期短、产品纯度较高等优点，已经成为国内外工业生产核黄素的发展趋势。以下将对微生物发酵工艺进行介绍。 3.1微生物菌种 自然界中，可以代谢产生核黄素的微生物有很多，包括真菌（如酵母菌），细菌等，而应用于核黄素工业生产的菌种非常少。在微生物发酵法中，要提高核黄素产量和经济效益的，优良的菌种是必要条件之一[5]。常用的有棉病阿舒囊霉（Ashbya gossypii）、枯草芽孢杆菌（Bcillus subtilis）和阿舒假囊酵母（Eremothecium ashbyii）等（表1）[4]。 表1 核黄素工业生产中常用菌种 菌种名称 学名 分类地位 阿舒假囊酵母 Eremothecium ashbyii 酵母 Candida flareri 酵母 Saccharomyces cerevisiae 酵母 棉病阿舒囊霉 Ashbya gossypii 霉菌 枯草芽孢杆菌 Bcillus subtilis 细菌 3.2生产过程 微生物发酵法生产核黄素，采用三级发酵法。将在25℃培养成熟的核黄素产生菌的斜面孢子用无菌水制成孢子悬浮液，然后接种于种子培养基中培养（30℃，30～4030℃，160小时），得到核黄素发酵液。 培养菌种 → 发酵 → 提纯 → 干燥 → 检验包装 → 成品 图1 核黄素发酵生产主要工艺流程 3.2.1菌种的选取 随着分子生物技术、基因工程技术等的发展，核黄素生产菌将具备产量高、耗能低、产品纯度低等优点。姜小山等以阿舒假囊酵母为出发菌株，在合成培养基上诱变筛选得到了数株抗嘌呤拮抗物8-AG的突变株，进行传代和摇瓶发酵试验，发现核黄素的产量比出发菌株最高提高15.5%[6]。由此可见，利用基因工程等手段选取优良菌种，是非常必要且有效的。 菌种 → 茄子瓶斜面 28℃ → 9d 茄子瓶斜面 28℃ → 3-4d 孢子悬浮液 → 种子罐 29-30℃ → 34-36h 发酵罐 29