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电镜技术与细胞超微结构复习题 1.电子显微镜是一种什么仪器呢? 从本质上讲，电镜是一种助视仪器。人类认识自然界大部分信息来自眼睛。但是正常人眼在明视距离25cm时，只能将相距0.2mm的两个物体分辨，小于0.2mm的物体结构细节人眼分辨不清。为了能看到生物结构更小的细节，科学家发明了各种助视仪器，不断提高人眼的分辨率，这些助视仪器有放大镜、望远镜、各种显微镜等。 2.电子显微镜科学主要包括三个方面的内容: 1.各种电子显微镜的设计与制造； 2.电子显微镜样品制备以及有关的各种设备； 3.电子显微镜图像的处理、分析和解释。 在生物电子显微技术中，同样是研究和解决电子显微镜应用于生物学时这三方面的内容。 1932年他们把上述研究成果写成报告井公布于世，人们多把1932年定为“电镜诞生年”。 1939年Ruska等在德国Siemens公司，研制并生产了第一系列商品电镜，其分辨力为10nm，共生产了 40台。 1942年，M.Mullan在剑桥大学研制成功第一台扫描电镜实验室装置； 电子显微镜的定义：它以电子束作为“光源”（电子束的波长比可见光的波长短得多，使电镜的分辨率大幅度提高），利用电磁透镜成象，并与一定的机械装置、电子和高真空技术相结合，所构成的现代化、综合性精密电子光学仪器。 一、透射式电子显微镜 是一种电子束透过样品而直接成像的电镜，其电子束的加速电压一般为 50～l00kV，样品厚度1～100nm(一般为50nm左右)。 透射电子显微镜特点： 1．分辨率极高 点分辨率0.2～0.3nm，晶格分辨率0.1～0.2nm。 2.放大倍数高、变化范围广：几百倍至到几十万可调。 3．制样技术 以超薄切片法为主，此外还有负染法、复型法等，样品制备比较复杂。 4．图象特点 视场范围小，为二维结构平面图像。 5．应用范围 广泛用于研究生物样品局部切面的超微结构，生物大分子结构以及冷冻蚀刻复型膜上的生物膜超微结构，非生物样品的纳米结构观察等。 二、扫描式电子显微镜 概念 电子束照射在样品上，产生二次电子等信息，而后再将二次电子等信息收集起来放大成像。扫描电镜图像实为间接成像，其加速电压在1～30kV之间。 扫描电子显微镜特点： 1．分辨率较高 一般为3～6nm，场发射式扫描电镜可达1～2nm；放大倍数一般为 20万倍，场发射式可达40万倍；放大倍率连续可调。 2．制样技术 以样品表面观察法为主，此外还有冷冻割断内部结构观察法、高分辨样品制备法及管道铸型法等；可观察大而厚的样品，制备方法较为简单，样品的适应性较强。 3.图像特点 景深长，图像层次丰富，立体感强，为三维结构图像。 4.应用范围 广泛应用于生物样品表面及其断面立体形貌的观察，并具有多种分析功能。 三、分析型电镜 (一)概念 为装有扫描附件、能谱仪(EDX)和波谱仪(WDX)的透射电镜。 (二)特点 除具有透射电镜和扫描电镜性能以外，还可对样品微区内(几个um3)的元素，进行定性、定量综合分析。 四、超高压电镜(HVEM) (一)概念 为加速电压在500kV以上的透射电镜。 目前世界上超高压电镜的最高加速电压为3000kV；世界此类电镜数量较少。 (二)特点 1．分辨率高 电镜加速电压高，穿透力强，分辨率高，对样品损伤小。 2．制样技术 该电镜可观察厚样品 (＞100nm)和含水的样品，如利用特殊“压力样品室”，研究生活细菌和培养细胞等。 3．图像特点 可观察细胞表面、内部及细胞骨架结构，还可通过“叠加法”对图像进行立体化处理。 4．应用范围 可广泛应用于医学生物学研究中厚样品、含水样品超微结构的观察，还可用于观察活体样品，为细菌、细胞培养中的动力学观察开辟了新途径。 缺点：此类电镜造价很高，难于普及。 电镜的分辨力还受以下因素影响： (1)电镜本身的真正分辨力(部件的加工精度，出厂前的调整情况等) (2)电镜的工作状态，如电镜加速电压的大小、电镜机械与电气合轴情况、真空及高压稳定度，电镜污染情况等 (3)样品方面的问题，如样品的性质、样品的厚度、被观察细节的形态及位置、样品的反差条件等。 放大倍率（放大倍数） 显微镜的放大倍率与其分辨力密切相关， 放大倍率(M有效)＝人眼分辨力／显微镜分辨力 人眼的分辨力为0.2mm 球差：透镜缺陷使近轴磁场与边缘磁场对电子束偏转能力不同，使一质点成像为一个弥散球。 像散：电子透镜实际上不可能制作得完全对称，使得透镜在不同子午面上的焦距有差别，即 出现像散。 色差：电镜的光源是电子束，其波长随加速电压而变动。当加速电压不稳定时，造成电子束波长变异，因而发生类似的像差，使图象分辨率下降，称为色差。 畸变：主要是由各透镜的缺陷综合形成的。 七、电子