小剂量雌激素对癫痫大鼠行为学、海马神经元损伤和炎症相关作用研究.pdfVIP

复旦大学博士研究生卑业论文 中文搐要 小剂量雌激素对癫痫大鼠行为学、海马神经元损伤及炎症相 关作用研究 中文摘要 雌激素在诸多急慢性神经系统疾病中发挥神经保护作用。本课题组前期在海 人酸(kanic acid，KA)尾静脉注射癫痫模型中观察到苯甲酸雌二醇(EB)干预可 减轻癫痫持续状态(status 神经元缺失，这在其他癫痫模型中也得到了证实。雌激素神经保护作用的具体机 制目前认为主要包括神经营养作用、抗凋亡作用和抗炎作用。在癫痫中研究最多 的是雌激素的神经营养作用，对其抗炎作用研究甚少，而免疫炎症机制在癫痫中 的作用越来越受重视。 化学致痫剂、电刺激等多种癫痫模型中均可观察到癫痫发作后快速诱导的炎 症反应，主要包括小胶质细胞和星形胶质细胞活化、经典的炎性细胞因子!t1]IL—lB、 TNF．0【、IL．6表达增加，同时伴随下游炎症级联反应(TLR、NF．r．B、补体、趋 化因子、CRP等)产生。炎症反应在一定程度上促进了癫痫发作病理生理进程， 并可导致癫痫相关的海马病理性改变，如神经元死亡和再生、胶质细胞再生、苔 藓纤维发芽等。 雌激素在脑外伤、卒中、神经变性疾病体内外研究中均观察到可通过抑制炎 症反应发挥神经保护作用。由于大剂量雌激素副作用多，而目前关于大小剂量尚 无明确界定，一般认为本实验选用的10I_tg／rat为小剂量雌激素，所以本课题旨在 研究小剂量EB在匹罗卡品癫痫模型中对海马神经元损伤的影响及炎症反应在其 中的作用，并对雌激素作用的受体机制进行初步探索。 第一部分 小剂量雌激素对去势雌性大鼠癫痫行为学及海马神经元 损伤影响 目的：观察小剂量EB预处理对去势雌性大鼠癫痫行为学及海马神经元损伤 的影响。方法：成年雌性SD大鼠阴道涂片确定有2个正常生理周期后行双侧卵 EB或O．1ml芝麻油皮下注射连续4d。末次给药后6h进 组分别给予10I-tg／0．1ml 行匹罗卡品(320mg／kg，i．p．)致痫或等量生理盐水腹腔注射。记录癫痫发作潜 复旦大学博士研究生毕土论文 中文摘要 伏期、重型发作潜伏期、死亡率，SE后8h、24h处死，心脏采血2ml离心取血 清，大鼠灌注取脑制备冰冻切片。电化学发光法检测SE后24h各组血清雌二醇 (E2)浓度以监测体内雌激素状态。尼氏染色观察癫痫后不同时间点海马CAl、 CA3、hilus区神经元形态及分布情况，Fluoro．JadeB(FJB)染色和NeuN免疫 荧光染色分别评估神经元变性和存活情况。结果：1、本实验部分致痫大鼠35 只，4只大鼠致痫失败，余大鼠均达4／5级反复发作(SE)。d,N量EB干预后大 鼠癫痫发作的潜伏期和重型发作潜伏期缩短，SE后8h、24h存活率增加，但差 异均无统计学意义。2、SE后24h外周血E2浓度检测显示EB干预可导致血E2 pmol／L)的2．5倍，痫性发作对血E2浓度无明显影响。3、尼氏染色显示致痫后 8h组海马各亚区锥体细胞排列整齐，结构完整，与未致痫组相比胞体略小，胞 浆中央淡染区不明显。致痫后24h组海马CAl、CA3和hilus区均可见胞膜破裂、 尼氏小体外露等。4、F旧染色显示未致痫组和致痫8h组染色阴性，致痫后24h E2水平持续(30h)维持在动情前期水平2．5～3倍之上，癫痫发作本身对大鼠 血清E2水平无显著影响；小剂量EB对匹罗卡品癫痫发作潜伏期及重型发作潜 伏期无明显影响，仅在一定程度减少SE后死亡率，但差异尚无显著统计学意义； 匹罗卡品诱导的SE持续lh即可引起海马各亚区神经元迟发性变性(SE后24h)， 小剂量EB预处理可明显减少SE后海马hilus区神经元迟发性死亡。 第二部分 小剂量雌激素对去势雌性大鼠癫痫发作后海马炎症反应影响 目的：观察小剂量EB干预在雌性去势大鼠癫痫发作后海马炎症反应中的作用。 方法：参考第一部分制备动物模型，SE后8h、24h处死心脏采血、完整剥离海 马组织。全血离心取血清，选右侧海马组织加0．01MPBS匀浆取上清液。酶联免 疫吸附法测定血清和海马匀浆上清液中IL．1p和TNF．0c含量。另取第一部分脑片 行