小剂量顺铂联合DC疫苗对小鼠宫颈癌移植瘤影响的实验探究.pdfVIP

中文摘要 小剂量顺铂联合DC疫苗对小鼠宫颈癌移植瘤影响的 实验研究 摘 要 目的：采用小剂量顺铂联合DC疫苗作用于小鼠宫颈癌移植瘤，观察 其对小鼠瘤组织中免疫抑制因子TGF．131、IL．10的影响；研究小鼠瘤组织 顺铂后是否可提高DC疫苗的抗肿瘤免疫效应。 方法： 1荷瘤小鼠模型建立：取对数生长期小鼠宫颈癌U14细胞用计数板 计数，将浓度调整至1 7天后开始抑瘤实验。 2DC疫苗制备：取对数生长期U14细胞，经射线照射灭活后反复冻 融制备肿瘤细胞抗原。颈椎脱位法处死未荷瘤小鼠，无菌状态下取骨髓细 髓来源的树突状细胞。将小鼠骨髓来源的DC与灭活的肿瘤细胞抗原混合 培养，即得到肿瘤抗原致敏的DC疫苗，流式细胞仪鉴定DC表型。 3抑瘤实验：将造模成功小鼠随机分成4组，每组10只：对照组10 只，给予DC疫苗肿瘤局部注射一次，一周后再注射一次；顺铂组10只， 给予顺铂腹腔注射0．2ml／只，每天1次，连续14天；DC疫苗和顺铂联合 组10只，给予顺铂腹腔注射0．2ml／只，每天一次，连用3天后，给予DC 疫苗肿瘤局部注射一次，一周后重复上述步骤。描绘肿瘤生长曲线，称量 瘤重，计算抑瘤率。 0用 麦克奥迪医学图像分析软件对组化结果行定量分析，TGF．p1和Ⅱ．1 胞用阳性细胞百分比表示它们所占百分比。 5数据分析：采用多样本均数比较的方差分析及两两比较的S．N-K 中文摘要 立、、， 思义。 结果： 1 DC鉴定：倒置显微镜观察，培养第7天的DC可见树突样突起， 大部分悬浮生长。流式细胞仪鉴定，CDl 为典型成熟DCs。 2各组荷瘤小鼠的生长状态：接种瘤细胞后1-10天，各组小鼠生长 状态均良好，15天后对照组小鼠体重开始下降，出现活动量少、消瘦等 表现；顺铂组小鼠用药一周后，进食明显减少，用药两周后，发现精神萎 靡、活动迟缓等表现；DC疫苗组和联合组小鼠状态较好，体重无明显下 降趋势。 3DC疫苗和顺铂对小鼠移植瘤的影响：接种瘤细胞后1--10天，各 组小鼠移植瘤生长基本相同；11～15天，对照组小鼠移植瘤生长快于其 他组，联合组小鼠移植瘤生长最慢；16-24天，对照组小鼠移植瘤生长 明显快于其他三组，而顺铂组和联合组小鼠移植瘤开始变小，DC疫苗组 小鼠移植瘤于第18天开始变小，其中联合组小鼠移植瘤变小最明显。对 照组、DC疫苗组、顺铂组和联合组移植瘤重分别为(3．159士0．005)g、 均低于对照组(P0．05)，各用药组组间两两比较瘤重差异均有统计学意义 (尸O．05)；按抑瘤率计算公式得出，DC疫苗组、顺铂组、联合组抑瘤率 分别为11．55％、37．45％、45．08％，联合组抑瘤率最高，其次为顺铂组、 DC疫苗组，三组组间两两比较抑瘤率差异均有统计学意义(尸0．05)。 4免疫组化结果：对照组、DC疫苗组、顺铂组、联合组中TGF．B1 的OD值分别为(0．467士0．003)、(0．466士0．003)、(0．137士0．004)、 (0．136士0．004)、 (0．203士0．007)、 (O．357士0．005)、(O．200-2：0．008)、 (O．502土0．009)： CD4+T细胞所占百分比分别为(0．071士0．007)、(0．305士0．004)、 (0．066士0．006)、(0．31 (O．162--匕0．003)、 (O．1 (0．396士0．003)、59-2：0．005)、(O．398士0．005)。 顺铂组和联合组TGF—p1、IL．10的表达量分别与对照组、DC疫苗组相比， 中文摘要 差异均有统计学意义(尸O．05)；而顺铂组与联合组相比、DC疫苗组与 细胞所占百分比分别与对照组、顺铂组相比，差异均有统计学意义