第七组液相色谱-核磁共振联用技术在药物分析中及应用.doc

药物分析课程论文综述 液相色谱-核磁共振联用技术在药物分析中的应用 药学2011级（2）班 刘星明（1103501226） 张 婷（1103501227）林敏燕（1103501228） 刘培能（1103501229） 指导教师：周漩 2014 年 6 月 摘 要 液相色谱（LC）是分离各种未知混合物的高效能的物理分离技术，核磁共（NMR）是结构分析的强有力手段。液相色谱–核磁共振（LC-NMR ）联用技术能达到快速分离、结构鉴定并且定量分析的目的，该技术在药物分析中的应用非常广泛，具有广阔的应用前景。本文主要对LC-NMR 联用技术在化学药物分析（包括未知杂质的结构分析、混合物中已知成分的定量分析）、中药 物分析（包括异构体分析、新化合物的结构鉴定代谢产物分析中的应用进行详细的 关键词 ：生物碱；中药材；含量测定 1 化学药物分析 1.1 未知杂质的结构分析 LC-NMR 联用技术在分析未知杂质时，无需纯品做对照，不产生破坏性，具有专属性强、快速、准确、精密度好等优点。为混合物的即时分离、鉴定提供了一种简便、快速、准确的方法。检测药物中的杂质是这一技术应用领域之一。 杨春[1]等用高效液相色谱-核磁共振(HPLC-CNM)联用技术中的连续流动和停止流动两种模式对萘哌地尔中杂质进行检测。所有的高效液相色谱采用Varian公司的Prostar-230高效液相色谱仪, 分析柱为Inertsil ODS-3柱(4.6I.D.
250mm, 5
m)，萘哌地尔样品用乙腈溶解, 浓度为5g/ L。连续流动的进样量为20
L, 停止流动的进样量为50
L。检测器为VarianProstar-330二极管阵列检测器, 紫外检测波长为210nm。HPLC分离条件为乙腈
磷酸缓冲溶液=65
35( pH7.8~8.0)。所有的图谱均在INOVA-500核磁共振仪上完成。HPLC-NMR采用反相60
L流动探头。WET脉冲序列抑制乙腈和重水的溶剂峰, 同时抑制乙腈的卫星峰。在没有纯品的对照下，根据1HNMR,1H-1HCOSY谱完成了主要杂质1-萘环-丙三醇结构鉴定。 联用技术同时能得到化合物的UV、NMR、MS信息，为化合物分析提供了全面的信息。孙煌[2]等应用HPLC-MS/MS/核磁共振(1H-NMR/13C-NMR/HMBC) 技术，对多索茶碱及其未知杂质进行结构分析,首次发现并确定多索茶碱未知杂质的结构。采用Inertsil ODS-3（4.6μm,2.1mm×150mm,迪马公司），流动相为乙腈-水( 82:18) ，进样量为10μl，通过ESI 与LC相联采用全扫描一级质谱及全扫描二级质谱同时测定。通过多索茶碱对照品及茶碱对照品确定未知杂质，通过其产物离子推测，该未知杂质为多索茶碱的同分异构体1,3-二甲基-9-（1,3-二氧环戊基-2-基）甲基-3,9-二氢-1H-嘌呤-2，6-二酮。 采用联用技术已经证明是一种有效的研究工具，特别是在药物研发、生产过程中。 1.2 混合物的定量分析 核磁共振波谱用于定量分析的基础是不同化学环境上的原子核共振吸收峰面积只与它的原子数有关，因此，不需要引进任何校正因子，不需要为每一种被测物选择相应的标准品。LC-NMR 广泛应用于有机化合物的定性分析，它在化合物纯度定值含量测 定中也具有很多优势，现已经广泛应用于药物合成及生产中。 《美国药典》规定使用定量 NMR法，以苯甲酸苄酯为内标物，进行亚硝酸戊酯的定量分析。此外，LC-NMR 法还应用于多种药物的副产物或降解产物含量测定，具有快速、简便、专属性高的特点；与其他方法相比，有不破坏样品，信号峰不会发生重叠等优势[3]。 柳娜[4]等采用HPLC-PDA和核磁共振(NMR)法定性定量分析。流动相为氘代甲醇–水-乙酸（40|：60：0.5），以1.0 mL/min的体积流量在Pure 2811C18 色谱柱（250 mm×8mm，20~40μm）中分离样品，柱温室温，检测波长254 nm。Bruker DRX-500 NMR 仪。杜仲中环烯醚萜类化合物京尼平甙酸(GPA)和京尼平甙(GPS)的质量分数分别为w( GPA) = 94.
69%和w( GPS) =93.
27%，该方法能够满足一般的混合物的定量分析，且成本低。 Lienau [5]等用LC-NMR 联用技术同时分离并定量分析了生育酚这一大类物质。HP1100型HPLC系统，流动相为氘代甲醇–甲醇（5 ∶95），以0.4 mL/min的体积流量在Bischoff C30 色谱柱（250 mm×4.6 mm，3 μ m）中分离样品，柱温22 ℃，检测波长2