组蛋白去乙酰化酶抑制剂联合蛋白酶体抑制剂对人套细胞淋马瘤细胞株Z-138生长调控的探究.pdfVIP

中文摘要 组蛋白去乙酰化酶抑制剂联合蛋白酶体抑制剂对 人套细胞淋巴瘤细胞株Z-138生长调控的研究 ． 摘 要 。 目的： cell 套细胞淋巴瘤(mantle 霍奇金淋巴瘤的一个特殊亚型，其侵袭性高，预后差，临床上难以治 愈，尽管一些新的治疗手段如硼替佐米、利妥昔单抗等用于治疗套细胞 淋巴瘤，但患者的总生存没有明显的提高，急需寻找新的治疗手段。组 蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase 修饰为作用靶点，使组蛋白和非组蛋白乙酰化，通过多种途径诱导肿瘤 细胞的凋亡和分化，引起细胞周期阻滞，抑制肿瘤细胞增殖，并且与一 些抗肿瘤药物联用具有协同作用。本实验通过研究组蛋白去乙酰化酶抑 制剂SAHA联合蛋白酶体抑制剂硼替佐米对人套细胞淋巴瘤细胞株Z． 138细胞生长调控的影响，探索其作用机制，以期为临床治疗提供理论 基础和实验数据，寻找套细胞淋巴瘤新的治疗手段。 方法： 1．细胞培养和传代 人套细胞淋巴瘤细胞株Z．138，培养于含体积分数10％的灭活胎牛 均采用对数生长期细胞，台盼蓝染色拒染率95％以上。 2．MTT法检测组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA和／或蛋白酶体抑制 剂硼替佐米对Z．138细胞生长的影响 2．1SAHA抑制Z．138细胞增殖的实验 板，随机分为对照组和实验组(不同剂量SAHA组)。对照组加入100卜d 72h向每孔中加入10Itl 一 中文摘要 养箱中孵育4h，然后离心培养板，小心吸去上清，向每孔中加入150I_d 处测量各孔的吸光度值。 2．2硼替佐米抑制Z．138细胞增殖的实验 ． X 取对数生长期的Z．138细胞悬液，以2105／ml的密度接种于96孔 板，随机分为对照组和实验组(不同剂量硼替佐米组)。对照组仅加细胞 培养液，实验组依次加入终浓度为1、2、4、6、8、10nM硼替佐米，+ 同上述方法分别于加药后的24、48、72h测量各孔的吸光度值。 2．3SAHA联合硼替佐米对Z．138细胞增殖的影响 X 取对数生长期的Z．138细胞悬液，以2105／ml的密度接种于96孔 板，随机分为对照组、SAHA组、硼替佐米组和SAHA+硼替佐米组，分 别于加药后的24、48、72h测量各孔的吸光度值，检测方法同上。． 3．流式细胞术检测SAHAan／或硼替佐米作用于Z．138细胞后细胞周 期和凋亡的变化 取对数生长期的Z．138细胞，以不同浓度SAHA和／或硼替佐米处理 Triton．X100 期和凋亡率。 4．流式细胞术检测不同浓度SAHA和／或硼替佐米处理Z．138细胞后 NF．KB(p65)蛋白的表达情况 取对数生长期的Z。138细胞，加入不同剂量的SAHA和／或硼替佐 体，室温避光反应半个小时后加入二抗，应用流式细胞仪检测NF．KB (p65)蛋白的表达情况。 5．流式细胞术检测不同浓度SAHA和／或硼替佐米作用于Z．138细胞 后bcl．2蛋白的表达情况 取对数生长期的Z．138细胞，加入不同剂量的SAHA和／或硼替佐 个小时后加入二抗，应用流式细胞仪检测bcl．2蛋白的表达情况。 CD20的表达情况 中文摘要 ．一 3ml，随机分成对照组和实验组，对照组仅加入细胞培养液，实验组依次 SAHA，培养24h后收集细胞， 加入终浓度为0．005、0．010、O．1009M 4。C CD20的表达情况。 ’ 结果： (6．65 4-1．18)％、(16．654-1．45)％、(43．15 (7