桂利嗪对喹啉酸致学习记忆障碍谷氨酸能神经元的影响.docVIP

桂利嗪对喹啉酸致学习记忆障碍谷氨酸能神经元的影响 苏湲淇，董志1， 重庆医药高等专科学校药理教研室，重庆400030；1重庆医科大学药理学教研室，重庆400016 摘要：目的 研究桂利嗪(cin)对兴奋毒喹啉酸(QA)损伤的谷氨酸（Glu）能神经系统是否有保护作用，并研究其相关机制。方法：应用微量注射方法，将喹啉酸注入大鼠双侧海马CA1区，建立大鼠学习记忆障碍模型，探讨cin对QA损伤海马神经元保护作用及其相关作用因素。结果 桂利嗪可降低QA损伤大鼠Morris水迷宫实验中其寻找平台平均潜伏期及穿梭箱实验中其回避潜伏期，与模型组比较有显著性差异；使大鼠学习记忆障碍模型脑神经元病理改变减轻，并明显减轻其脑组织病理损伤；能明显增加QA损伤大鼠海马中Glu阳性神经元的数量。结论 桂利嗪能通过减轻Glu能神经系统的损伤来改善模型大鼠学习记忆能力的障碍。 关键词 学习记忆障碍，兴奋毒，喹啉酸，模型 近年来的研究表明，兴奋性毒性损伤是中枢神经系统疾病和损伤时神经元变性坏死的重要机制之一[1]。喹啉酸（Quinolinic acid，QA）为谷氨酸类似物，是一种潜在的内源性毒物，而海马是对QA最敏感的脑区。宋前流等[2]在富含Glu能神经元通路的海马CA1区注入QA，通过其选择性的破坏谷氨酸（Glutamic acid ，Glu）能神经元，制备成了Glu能毁损的学习记忆障碍模型。桂利嗪（Cinnarizine, Cin）为钙离子阻断剂，已有实验表明桂利嗪对脑缺血损伤具有显著的保护作用，临床上广泛用于治疗脑血管疾病，冠状动脉硬化等[3-4]，但桂利嗪对喹啉酸所致的海马神经元的损伤是否有保护作用，尚不清楚。 本实验利用宋前流等人的造模方法建立大鼠学习记忆障碍模型，通过观察海马内Glu阳性神经元的数量，研究桂利嗪对兴奋毒喹啉酸损伤的Glu能神经元是否有保护作用，并探讨其可能的相关机制。 1 材料与方法 1.1 动物与仪器 健康Wistar 大鼠，雄性，清洁级，体质量（220 ± 23.35）g，由第三军医大学大坪医院实验动物中心提供，实验动物合格证号SCXK (军)2002008。脑立体定位仪（西北光学仪器厂），Morris 水迷宫和大鼠穿梭箱（中国医学科学院药研所），微量注射器（上海保西玻璃仪器厂），3k30型低温超速离心机（美国Sigma公司），BH-2型光学显微镜（Olympus，日本）。 1.2 药品与试剂 桂利嗪（美国Sigma公司，批含量 99.4%），喹啉酸（Aldrich 化学公司，批含量 99.6%），酪氨酸羟化酶测定试剂盒（Tyrosine hydroxylase，TH）、Glu测定试剂盒、胆碱乙酰化酶（Choline acetylase，CHAT）测定试剂盒、色氨酸羟化酶（Tryptophan hydroxylase，TPH）均由武汉博士德公司提供。免疫组化试剂盒由北京中山公司提供。 1.3 动物分组 动物经行为学筛选后随机分为假手术组、模型组及桂利嗪治疗组（n = 8）mg/kg、20 mg/kg、60 mg/kg 3个剂量组（动物手术后立即分别灌胃桂利嗪7 mg/kg、20 mg/kg、60 mg/kg），假手术组及模型组分别给予等量灭菌生理盐水灌胃。 1.4 模型的制作 参见文献[5]。实验动物用水合氯醛以350 mg/kg经腹腔注射麻醉后，剪去颅顶切口区毛，固定在大鼠脑立体定位仪上。酒精消毒后，取颅顶正中切口，参照大鼠脑立体定位图谱[6]（AP：3.5 mm， ML:2.0 mm，H:2.7 mmCA1区立体定位后，钻开颅骨，用微量注射器垂直进针，将溶解的QA 2 μl（含150 nmol）缓慢注入到海马CA1区，假手术组注入等量的PBS缓冲液。每侧注入时间为5 min，留针5 min，局部消毒后缝合皮肤。 1.5 指标的检测 1.5.1 行为学检测 大鼠空间学习记忆能力检测（Morris 水迷宫）[7]：上述小鼠于术后第7 天进行行为学测试，以Morris 水迷宫实验测定空间学习记忆能力。Morris水迷宫由圆形水池、自动摄像机及电脑分析系统组成。测试前将水注入池中, 水深30cm (即水面高出站台表面1cm, 使小鼠不能见到站台) , 加入奶粉使水呈乳白色, 水温控制在( 26 ±1) ℃,每只小鼠头部染黑，以便摄像机自动跟踪记录。实验在隔音、较暗的房间内进行, 各种实验条件保持不变。实验分为两部分：（1）定位航行实验（Place navigation）：用于测量大鼠对水迷宫学习和记忆的获取能力。实验历时5天，第一天让大鼠自由游泳2分钟；从第二天起，每天分上、下午两段，每段训练4次，, 将小鼠于象限边缘1/ 2 弧度处头朝池壁入水, 同时摄像